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Thewellbio應(yīng)用3D培養(yǎng)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)體外研究細(xì)胞在體內(nèi)的行為與對刺激的反應(yīng)，如溫度,、pH變化,、營養(yǎng)吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)及分化等,。公司研發(fā)供應(yīng)的細(xì)胞體外3D培養(yǎng)體系采用無動(dòng)物源成分的多糖凝膠材料,，模擬出天然的細(xì)胞胞外基質(zhì)環(huán)境，同時(shí)具有多用途,、高精度,、高性價(jià)比、操作簡便和節(jié)省時(shí)間等特點(diǎn),。因此3D培養(yǎng)技術(shù)越來越多地被應(yīng)用到藥物篩選,、組織工程、臨床前研究,、細(xì)胞治療和基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域,。

對于*次使用VitroGel 3D系統(tǒng)，請閱讀這些常見問題,，以確保*效果,。

1.我應(yīng)該選擇哪種產(chǎn)品，VitroGel 3D或VitroGel 3D-RGD,？

如果您使用貼壁細(xì)胞系,，建議您使用VitroGel 3D-RGD。如果您使用非貼壁細(xì)胞系,，或者您想要更靈活地控制生長因子/蛋白質(zhì),，我們建議您使用VitroGel 3D。請[email protected]如果你需要一個(gè)定制的產(chǎn)品,。

2.產(chǎn)品有多穩(wěn)定,？

VitroGel 3D在4-40°C之間是穩(wěn)定的,。請勿將產(chǎn)品冷凍或?qū)⑺z溶液加熱至80°C以上。該產(chǎn)品在室溫下4℃或6個(gè)月未開封未開封18個(gè)月,。一旦打開,，請密封蓋子，保持在4°C,，以防止1個(gè)月內(nèi)污染和使用,。

3.如何調(diào)整水凝膠形成時(shí)間并作為可注射水凝膠進(jìn)行準(zhǔn)備？

水凝膠形成時(shí)間高度取決于水凝膠溶液和觸發(fā)溶液（細(xì)胞培養(yǎng)基/PBS）的混合比例,。我們建議將水凝膠溶液和介質(zhì)/ PBS以4：1（v / v）的比例混合成可注射的水凝膠,。水凝膠在混合后30分鐘內(nèi)應(yīng)穩(wěn)定。較高的混合比（水凝膠溶液：介質(zhì)> 4：1）會(huì)導(dǎo)致更長的水凝膠形成時(shí)間,。低混合比（水凝膠溶液：介質(zhì)<1：1）可能導(dǎo)致不可注射的水凝膠,。

4.水凝膠形成速度太快，我該怎么辦,？

水凝膠形成時(shí)間取決于幾個(gè)因素,，如凝膠濃度，培養(yǎng)基的離子強(qiáng)度和混合比,。如果水凝膠形成太快,，我們建議用DI水稀釋水凝膠溶液，然后與細(xì)胞培養(yǎng)基混合使其凝膠化,。稀釋后,，嘗試保持4：1的比例（稀釋的水凝膠溶液：細(xì)胞培養(yǎng)基= 4：1）進(jìn)行混合，因?yàn)檫@是我們用于我們的水凝膠系統(tǒng)的大多數(shù)培養(yǎng)基的*比例,。

5.當(dāng)將凝膠溶液與細(xì)胞培養(yǎng)基混合時(shí),，我可以做什么來保持氣泡形成？

氣泡問題與將凝膠溶液與細(xì)胞培養(yǎng)基混合后溶液粘度增加有關(guān),。這里有一些有助于減少氣泡形成的建議：
1）將水凝膠溶液預(yù)熱至37°C以降低凝膠溶液的粘度,。
2）將凝膠溶液和細(xì)胞培養(yǎng)基輕輕混合，并沿著孔板的壁緩慢移液,，不引入氣泡,。（有些用戶喜歡使用渦流而不是移液管進(jìn)行混合以避免氣泡）
3）在與細(xì)胞培養(yǎng)基混合之前用DI水稀釋凝膠溶液。
4）切割移液器吸頭以獲得更好的流量,。
5）如果混合后僅形成小氣泡,，在水凝膠頂部加入一層培養(yǎng)基，孵育過夜,。

6.如何調(diào)整zui終水凝膠的硬度？

通過在與細(xì)胞培養(yǎng)基/PBS混合之前稀釋水凝膠溶液可以調(diào)節(jié)zui終水凝膠的硬度,。請使用無菌去離子水稀釋水凝膠溶液,。不要使用PBS或其他離子溶液,。如果您需要比原始產(chǎn)品更高的水凝膠剛度，請與我們,。

7.應(yīng)該使用什么種子密度,？

我們建議對該水凝膠系統(tǒng)使用200,000-1,000,000個(gè)細(xì)胞/ mL。您可能需要相應(yīng)地每1-2天更換一次覆蓋的培養(yǎng)基,。

8.細(xì)胞在VitroGel 3D水凝膠中生長多長時(shí)間,？

我們已經(jīng)測試了水凝膠系統(tǒng)中細(xì)胞的生長長達(dá)兩周。依靠細(xì)胞系,，3D細(xì)胞培養(yǎng)可以持續(xù)更長時(shí)間,。一旦單元格的數(shù)量和大小增加，您可能需要更頻繁地更換封面介質(zhì),。

10.球形形成前多久,？

通常，球形體形成在水凝膠體系中培養(yǎng)約5-10天,。形成時(shí)間可以根據(jù)細(xì)胞系而變化,。

11.3D文化后，我能從水凝膠中收獲細(xì)胞么,？

是的,，通過使用簡單的移液和離心方案，可以在3D培養(yǎng)后收獲細(xì)胞,。請下載完整的使用手冊,，并閱讀從水凝膠收集細(xì)胞的細(xì)節(jié)。

12.為什么水凝膠松散地粘到未處理的組織培養(yǎng)板上,？

未處理的組織培養(yǎng)板具有更疏水的表面,，其減少了孔板表面上的水凝膠/細(xì)胞的附著。為了更好的表現(xiàn),，我們建議使用經(jīng)過處理的組織培養(yǎng)板與VitroGel 3D系統(tǒng),。

13.膠凝是否可逆？

是,。如果水凝膠以適當(dāng)?shù)幕旌媳戎苽?，例?nbsp;4：1（水凝膠溶液：細(xì)胞培養(yǎng)基= 4：1），水凝膠將進(jìn)行特殊的可逆機(jī)械性能 - 剪切稀化和自愈,，這意味著水凝膠可以在剪切力下轉(zhuǎn)移到液體中,，例如移液或一旦剪切力停止，再次注入和恢復(fù)為水凝膠,。除了這種機(jī)制,，我們還可以操縱水凝膠對溫度變化或其他方法是可逆的。請[email protected]獲取定制解決方案。

14.在VitroGel 3D中生長的細(xì)胞是否可以分化,？

是,。通過使用新鮮的VitroGel 3D或其他2D或3D培養(yǎng)方法，可以從VitroGel 3D水凝膠系統(tǒng)和亞培養(yǎng)物中再次收獲細(xì)胞一段時(shí)間,。

15如何使用VitroGel 3D進(jìn)行共培養(yǎng)或夾心培養(yǎng)（逐層）,？

可以使用VitroGel 3D水凝膠系統(tǒng)進(jìn)行兩種或多種不同細(xì)胞類型的共培養(yǎng)。除了添加不同的細(xì)胞類型與水凝膠溶液共同培養(yǎng),，每種細(xì)胞類型也可以與水凝膠溶液混合并逐層加入,。在*層水凝膠變得穩(wěn)定后，仔細(xì)地將第二層細(xì)胞/水凝膠混合物覆蓋在*層細(xì)胞/水凝膠的頂部,。

16.我可以將細(xì)胞外基質(zhì)蛋白或其他分子化合物添加到VitroGel 3D水凝膠中嗎,？

是。細(xì)胞外基質(zhì)蛋白或其他分子化合物可以在水凝膠形成之前或之后加入到VitroGel 3D水凝膠體系中,。在水凝膠形成之前,，將蛋白質(zhì)或分子化合物加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，然后與VitroGel 3D水凝膠溶液混合,。在形成水凝膠之后,，可以將蛋白質(zhì)或分子化合物加入滲透到納米纖維基質(zhì)中的水凝膠的頂部。請注意,，由于蛋白質(zhì)或化學(xué)化合物中含有的鹽,，水凝膠形成時(shí)間和zui終凝膠硬度可能會(huì)發(fā)生變化。如果改變水凝膠性質(zhì),，我們建議在與VitroGel 3D水凝膠溶液混合之前用蔗糖溶液洗滌蛋白質(zhì)或化合物以除去鹽,。

17.VitroGel 3D是否與共焦顯微鏡或其他成像技術(shù)的染色和免疫熒光方案相兼容？

是,。細(xì)胞可以在水凝膠內(nèi)染色或從水凝膠中收獲,，然后染色。大多數(shù)熒光染料和免疫試劑可以用于標(biāo)準(zhǔn)方案,。請閱讀VitroGel 3D的完整使用手冊了解更多詳情,。此外，VitroGel 3D水凝膠在不同的成像系統(tǒng)中是透明和兼容的,，用于細(xì)胞觀察,。

18.我可以對在VitroGel 3D中培養(yǎng)的細(xì)胞的蛋白質(zhì)和核酸進(jìn)行分子分析嗎？

是,。在VitroGel 3D水凝膠中培養(yǎng)后,，可以從水凝膠中收獲細(xì)胞，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行分子分析,。

19.水凝膠是否可以從組織培養(yǎng)中撤出,，以進(jìn)行切片,？

是的，一旦水凝膠變得穩(wěn)定,，你可以把它從文化中分離出來,。添加*培養(yǎng)基后30-60分鐘內(nèi)水凝膠應(yīng)穩(wěn)定,。

20.我可以使用VitroGel 3D進(jìn)行體內(nèi)研究嗎,？

是?？梢栽谒z形成之前或之后注射VitroGel 3D用于體內(nèi)研究,。在水凝膠形成之前，可以將VitroGel 3D溶液直接注射到動(dòng)物中,，后者隨著其與生理環(huán)境的離子化合物接觸而變成水凝膠,。此外，VitroGel 3D水凝膠在水凝膠形成后具有先進(jìn)的注射性能,。以適當(dāng)?shù)谋壤旌纤z溶液和細(xì)胞培養(yǎng)基/PBS（我們推薦水凝膠溶液：培養(yǎng)基/PBS = 4:1v / v）,，zui終的水凝膠變得可注射用于體內(nèi)研究。使用這種方法,，細(xì)胞或??其他化合物可以在注射前在水凝膠中很好地混合,。

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