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EAE 模型誘導(dǎo)手冊(cè)
點(diǎn)擊次數(shù)：4133 發(fā)布時(shí)間：2016-9-20
EAE 模型誘導(dǎo)手冊(cè)：
EAE模型是一種以特異性致敏的CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)為主的，以中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)小血管周圍出現(xiàn)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)及髓鞘脫失為特征的自身免疫性疾病,，是人類多發(fā)性硬化（MS）的理想動(dòng)物模型,，在臨床神經(jīng)免疫學(xué)的研究中具有重要意義,。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：成年雌鼠C57/BL6小鼠 8周 15只
試劑準(zhǔn)備
產(chǎn)品 | 貨號(hào) | 包裝 | 數(shù)量 | 品牌 | 購(gòu)買單價(jià) |
MOG (35-55)多肽蛋白 | AS-60130 | 5 mg | 1 | AnaSpec | 4545 |
百日咳毒素 | list181 | 50µg | 1 | listlabs | 3300 |
結(jié)核菌素H37Ra | 231141 | 100mg | 1 | BD | 5000 |
弗氏不*佐劑 | 8642862 | 10ml | 2 | Mpbio | 150 |
器材準(zhǔn)備
器材名 | 數(shù)量 |
無(wú)菌陶瓷研缽 | 1個(gè) |
5ml玻璃注射器 | 1個(gè) |
振蕩器 | 1個(gè) |
28G一次性注射針頭 | 1盒 |
18G一次性注射針頭 | 1盒 |
1ml一次性注射器 | 1盒 |
一次性三通管 | 1個(gè) |
一次性塑料試管 | 1包 |
試劑配制：
1：髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白MOG (35-55)配制： 將AnaSpec公司的MOG (35-55)多肽蛋白溶于PBS中，濃度為2mg/ml
2: 準(zhǔn)備*弗氏佐劑（CFA）：將BD公司的結(jié)核菌素H37Ra粉末溶于MPBIO公司的弗氏不*佐劑而成（終濃度為4MG/ML）
稱取80mg結(jié)核菌素H37Ra粉末與不*佐劑混合,，注意每次加入一點(diǎn)點(diǎn)不*佐劑,，在研缽中充分研磨保證結(jié)核菌素*懸浮。
3:將配好的MOG (35-55)溶液和*弗氏佐劑1：1混合（MOG終濃度為1MG/ML),保存于4度冰箱,，并于24小時(shí)內(nèi)使用
5：百日咳毒素（PTX）配制： 取一只listlabs公司的百日咳毒素粉末，在管子中加入500ulPBS溶液,，濃度為100ug/ml,保存于4度冰箱,使用前再用PBS稀釋100倍
實(shí)驗(yàn)步驟：
1：*天：小鼠胸腹部皮下注射接種MOG和Mtb/CFA混合液 ,，復(fù)測(cè)2-4個(gè)點(diǎn),，共150ul/只。再腹腔注射稀釋后的百日咳毒素溶液（濃度為1ug/ml）200ul/只
2：第三天：再加強(qiáng)注射百日咳毒素溶液（濃度為1ug/ml）200ul/只