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EAE模型是一種以特異性致敏的CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)為主的,，以中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)小血管周圍出現(xiàn)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)及髓鞘脫失為特征的自身免疫性疾病，是人類多發(fā)性硬化（MS）的理想動(dòng)物模型,，在臨床神經(jīng)免疫學(xué)的研究中具有重要意義,。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

國(guó)內(nèi)外學(xué)者試用多種易感動(dòng)物建立EAE模型，以期闡明MS及EAE的發(fā)病機(jī)制,，并為其病情的監(jiān)測(cè),、復(fù)發(fā)的預(yù)防,、治療方案的選擇以及新療法或新藥物的篩選等提供可靠依據(jù),。本文就近年來(lái)EAE模型方面的研究綜述如下,。

EAE模型1.1 品系

從鳥類到哺乳類的多種動(dòng)物如雞,、小鼠、大鼠,、豚鼠,、家兔,、羊、犬,、猴等均可成功誘發(fā)EAE,，但不同種屬或同一種屬不同品系動(dòng)物的敏感性有很大差異,。對(duì)EAE敏感的動(dòng)物有Lewis,、DA大鼠，PL/J,、SJL/J小鼠,，Hartley、Strain13豚鼠,。雖然豚鼠對(duì)誘發(fā)EAE相當(dāng)敏感,，但其品系復(fù)雜，有關(guān)試劑缺乏,，一般不常用作實(shí)驗(yàn)對(duì)象,。相比之下大鼠及小鼠的背景知識(shí)及相關(guān)試劑則較為全面，遺傳學(xué),、免疫學(xué)等方面的研究也較深入,，且其EAE在臨床、病理,、免疫及生化改變等方面都與人類脫髓鞘疾病較為相似,，因此應(yīng)用。

用大鼠制備EAE有許多優(yōu)點(diǎn),，如品系多,，選擇余地大，繁殖快,，同一品系中個(gè)體間差異小,，實(shí)驗(yàn)方便。其中Lewis大鼠誘發(fā)的EAE具有穩(wěn)定性好,、敏感性高等特點(diǎn),，其病程為單相，多數(shù)可自行恢復(fù),，對(duì)再次誘發(fā)很快產(chǎn)生強(qiáng)的耐受性,，多用作EAE激發(fā)和緩解機(jī)制的研究。而SJL/L及PL/J小鼠對(duì)再次誘發(fā)的敏感性沒有明顯降低,，且?guī)缀蹩梢姷饺祟怣S的所有病理改變,，可誘發(fā)出更接近于人類MS的緩解復(fù)發(fā)型EAE模型，但它的EAE發(fā)生率及潛伏期變化較大,。人們對(duì)小鼠的遺傳背景了解得比較清楚,，因此小鼠更適用于有關(guān)基因、細(xì)胞間作用等領(lǐng)域的研究。然而不同品系小鼠對(duì)EAE的敏感性也不同,，有人將其分為EAE—易感（EAE—susceptible）和EAE—抵抗（EAE?resistant）兩種類型,。基因型分析結(jié)果表明,，單倍型為H?2s的小鼠（如SJL/J）及H?2q的小鼠（如DBA1/J）屬于EAE—易感型,。C57BL/10J及P/J小鼠可發(fā)生輕微的脫髓鞘病變。BABL/C和AKR/J小鼠基本不發(fā)生EAE,，被認(rèn)為是EAE—抵抗小鼠,。

不同品種或同一品種不同品系動(dòng)物對(duì)EAE的易感性主要受免疫反應(yīng)基因（Ir基因）影響，Ir基因的調(diào)節(jié)作用表現(xiàn)為T細(xì)胞表面受體對(duì)髓鞘堿性蛋白（MBP）的特異性表達(dá),。動(dòng)物的種類不同,，其受體表達(dá)能力不同，對(duì)自身抗原的反應(yīng)性不同,，因而對(duì)EAE的易感性也不同,，因此在選擇動(dòng)物時(shí)需要尋找EAE模型的敏感動(dòng)物。

鑒于對(duì)EAE敏感的Lewis,、DA大鼠,，PL/J，SJL/J小鼠的價(jià)格昂貴,、不宜獲得且難以飼養(yǎng),，國(guó)內(nèi)多采用價(jià)廉易得的Wistar大鼠，但其敏感性不及前者,。

1998年Jon等用猴建立了EAE動(dòng)物模型,，與嚙齒類EAE模型相比，其特征更接近人類脫髓鞘疾病MS,，并能以磁共振評(píng)估白質(zhì)損害和神經(jīng)組織病理改變,。

EAE發(fā)病有多種誘發(fā)因素，包括食物,、藥物及感染等,。大鼠的飼養(yǎng)環(huán)境級(jí)別越高，清潔度越高,，接觸誘發(fā)因素的幾率越小,，在相同條件下致敏，其發(fā)病率就越低,，因此選用普通動(dòng)物即可,。zui近有報(bào)道說(shuō)明，EAE的發(fā)病還與動(dòng)物的血腦屏障的形成有關(guān),。

EAE模型

1.2 年齡

EAE的發(fā)生發(fā)展與年齡密切相關(guān),。幼齡動(dòng)物發(fā)病后癥狀很快達(dá)到高峰,，隨后又迅速恢復(fù)，和成年動(dòng)物相比病程較短,，其抗原注射部位及CNS內(nèi)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度較輕,，并且幼齡動(dòng)物體重偏小，一般情況差,，易出現(xiàn)麻醉意外而死亡,。若動(dòng)物體重（周齡）偏大，則發(fā)病延遲,，且癥狀較重,，所以選擇受試動(dòng)物以青年期為佳,。但若作為抗原提供者,，其年齡可適當(dāng)放寬，一般大于4周即可,。

EAE模型

1.3 性別

MS多為青年女性,，EAE的發(fā)生發(fā)展也存在性別差異。一般來(lái)講,，雌性動(dòng)物較雄性敏感,，表現(xiàn)在雌性動(dòng)物的發(fā)病率高，臨床癥狀相對(duì)嚴(yán)重,，如Wistar大鼠及SJL/J小鼠,，但也有的動(dòng)物如Lewis大鼠，雄性較雌性敏感,。另外實(shí)驗(yàn)時(shí)間選擇在夏季比冬春季節(jié)誘導(dǎo)動(dòng)物模型的敏感性更高,。敏感性高的動(dòng)物，有時(shí)癥狀較嚴(yán)重且死亡率高,，應(yīng)引起注意,。

EAE模型抗原的選擇

常用的致敏抗原有髓鞘堿性蛋白（MBP）或其多肽片斷（如MBP peptide 89—101）以及蛋白脂（PLP）等。長(zhǎng)期以來(lái)MBP和PLP被認(rèn)為是引起EAE和MS的主要抗原,，MBP是髓鞘中抗原性zui強(qiáng)的蛋白質(zhì),，占髓鞘總蛋白的40%，等電點(diǎn)在10以上,，是強(qiáng)堿性蛋白質(zhì),。研究表明MBP可激活體內(nèi)Th+細(xì)胞，使之穿過(guò)血腦屏障,，攻擊自身神經(jīng)髓鞘的MBP,，從而導(dǎo)致中樞神經(jīng)白質(zhì)脫髓鞘，引起EAE或MS,。近年來(lái)多用MBP肽代替MBP免疫動(dòng)物,。PLP是高度疏水的膜蛋白,，對(duì)PLP不同肽決定簇發(fā)生反應(yīng)的CD4+T細(xì)胞能誘導(dǎo)急性、慢性復(fù)發(fā)型及慢性進(jìn)展型EAE,。在MS患者體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)與PLP抗原決定簇發(fā)生反應(yīng)的T細(xì)胞,。

zui近研究表明，體內(nèi)含量較少的髓蛋白,，如髓寡樹突細(xì)胞糖蛋白（MOG）,、髓堿相關(guān)糖蛋白（MAG）等也是很強(qiáng)的抗原。髓鞘素（Myelin）,、脊髓組織勻漿（SCH）,、腦組織勻漿（BH）等也可作為致敏抗原。某些非髓性蛋白,，如神經(jīng)原蛋白（neuronal protein,S100β）,、膠原纖維酸蛋白（GFAP）也參與EAE的發(fā)病。

通常不同品種動(dòng)物對(duì)同一抗原的敏感性不同,、不同抗原的抗原性也不同,，并且不同來(lái)源的同一抗原的活性也有明顯差異。一般情況下,，抗原性強(qiáng)弱依次為豚鼠脊髓>大鼠脊髓>牛脊髓,，脊髓組織>腦組織，豚鼠MBP>牛MBP,。蛋白或多肽單體不但結(jié)構(gòu)明確,，而且可以定量，因此利于進(jìn)行EAE發(fā)病機(jī)制研究,，但不易獲得,。脊髓勻漿和腦組織勻漿兩種抗原均含有多種抗原表位，且易于獲得,，適用于多種動(dòng)物,，但其成分復(fù)雜，不易定量,，這給某些特殊研究造成不便,。誘導(dǎo)鼠類產(chǎn)生EAE的異種抗原，以新鮮豚鼠脊髓制備的抗原佐劑乳化物為,。在一定范圍內(nèi)抗原的量和EAE的發(fā)病率及發(fā)病程度有相關(guān)性,，注射抗原佐劑乳化物的劑量越大，EAE的發(fā)病率越高,?？乖膭┝靠梢騽?dòng)物的品系、抗原種類,、免疫方法,、研究目的等的不同而有很大變化,。另外，抗原的物理狀態(tài)也很重要,，高分散度的抗原易于被吞噬和遞呈,，進(jìn)而較率地激活免疫系統(tǒng)。

EAE模型佐劑的選擇

提取的抗原需與佐劑混合制成抗原乳劑后才能致敏動(dòng)物,?？乖魟榉翘禺愋悦庖咴鰪?qiáng)劑，它可改變抗原的物理性狀,，延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的儲(chǔ)留時(shí)間,，刺激抗原提呈細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，從而增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答效果,，它還能引起遲發(fā)性血腦屏障通透性增加和自身免疫反應(yīng),。zui常用的佐劑為*弗氏佐劑（CFA），CFA在提高抗體的幅度和持久性方面是當(dāng)今作用zui強(qiáng)的佐劑,。國(guó)外一般均采用人型結(jié)核桿菌（H37Ra）作為弗氏佐劑,。不同實(shí)驗(yàn)室所用的致敏抗原及佐劑中分枝結(jié)核桿菌蛋白濃度有所差別,，提高結(jié)核桿菌的濃度,，可提高EAE 的發(fā)生率及復(fù)發(fā)率，但也容易引起注射部位壞死,。由于H37Ra在國(guó)內(nèi)不易獲得,，常采用廉價(jià)易得的卡介苗（BCG）來(lái)代替。

百日咳桿菌疫苗（BPV）毒素能增加血管壁的通透性和血管表面粘附分子的表達(dá),，有利于致敏的T細(xì)胞透過(guò)血腦屏障,，攻擊神經(jīng)髓鞘，造成對(duì)腦,、脊髓組織的免疫損傷,。于FCA中加入BPV可明顯縮短Wistar大鼠EAE的潛伏期，提高其發(fā)病率,，加重其臨床癥狀,，對(duì)EAE有明顯的促發(fā)作用。在用GPSCH誘導(dǎo)Wistar大鼠EAE的同時(shí),，給予BPV 可使EAE的潛伏期,、發(fā)病率、臨床癥狀,、體重及病理改變等方面與敏感的Lewis大鼠EAE的上述表現(xiàn)近似,。

EAE模型模型制備方法

EAE是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通過(guò)神經(jīng)組織（其中的某些成分）或病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生的。EAE的誘導(dǎo)有主動(dòng)誘導(dǎo)法和被動(dòng)誘導(dǎo)法兩種,。不同的免疫方法,，可影響抗原遞呈,，激發(fā)不同的免疫反應(yīng)，這不但影響EAE的發(fā)生率,，還可影響其發(fā)展與轉(zhuǎn)歸,。

通常采用主動(dòng)誘導(dǎo)法制備EAE模型，將抗原與佐劑的混合乳劑直接注射至動(dòng)物體內(nèi),，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的潛伏期,，誘導(dǎo)EAE的產(chǎn)生?？乖⑸洳课坏牟煌?，可影響EAE的發(fā)生率、潛伏期,、死亡率及復(fù)發(fā)率,。常用的注射部位有腳墊、頸部及背部（皮下,、皮內(nèi),、肌肉）、腹腔和尾靜脈等多種,，其中以皮下多點(diǎn)注射及腳墊注射的發(fā)病率zui高,，而頸部注射則有較高的復(fù)發(fā)率。 因多次注射易引發(fā)免疫耐受,，現(xiàn)在多采用單次注射抗原法,。

EAE的被動(dòng)轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)是研究其發(fā)病機(jī)制的zui直接證據(jù)，也是研究EAE的治療及預(yù)防措施的良好模型,。將抗原激活的PLP特異性T細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給同一品系的正常大鼠或小鼠,，也可引起EAE。MBP特異性自身反應(yīng)性T細(xì)胞在MS的發(fā)病機(jī)制中也起著關(guān)鍵作用,，T細(xì)胞必須先在外周活化,，通過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入CNS才能致病。

EAE模型臨床表現(xiàn)

EAE模型5.1 癥狀分級(jí)

EAE的神經(jīng)癥狀通常根據(jù)Kono等提出的標(biāo)準(zhǔn)分為5級(jí),。0級(jí)：無(wú)任何臨床癥狀,；1級(jí)：動(dòng)物尾巴無(wú)力，2級(jí)：尾部無(wú)力+肢體無(wú)力,，3級(jí)：肢體輕度麻痹,，4級(jí)：肢體嚴(yán)重麻痹，被動(dòng)翻身后不能復(fù)原,；5級(jí)：瀕死狀態(tài)或死亡,。

EAE模型5.2 發(fā)病過(guò)程

抗原誘導(dǎo)EAE后，如果發(fā)病,，一般都在注射抗原佐劑乳化物后10d左右開始出現(xiàn)癥狀,，第2～3周癥狀達(dá)高峰,。有報(bào)道Lewis大鼠用豚鼠全脊髓勻漿誘發(fā)EAE時(shí)其潛伏期為12.1 dpi（10～14 dpi），發(fā)病率為51/53,，臨床評(píng)分一般在2.5～3.5分左右,。采用BCG和Wistar大鼠建立的EAE模型，其發(fā)病率穩(wěn)定在50%左右,。存活者常在注射抗原后3周左右癥狀自行緩解,，一月左右基本恢復(fù)。隨癥狀緩解,，體重也逐漸恢復(fù),。如果注射抗原3周后未出現(xiàn)EAE癥狀，則不再發(fā)病,。

EAE模型小結(jié)

EAE是由針對(duì)CNS髓鞘發(fā)生免疫攻擊的CD4+Th1細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病,，抗原致敏的T細(xì)胞穿過(guò)血腦屏障進(jìn)入中樞，誘發(fā)對(duì)自身髓鞘抗原的免疫應(yīng)答,，導(dǎo)致腦及脊髓的免疫損傷,。EAE是人類MS的經(jīng)典動(dòng)物模型，通過(guò)對(duì)EAE發(fā)病機(jī)制,、病情發(fā)生發(fā)展規(guī)律,、臨床及病理改變、治療及預(yù)防等方面的深入研究,，能夠?yàn)镸S的治療提供充分的實(shí)驗(yàn)依據(jù),。

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