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NanoDrop 2000-Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度

Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)是NanoDrop的產(chǎn)品,，應(yīng)用液體的表面張力特性,，樣品體積只需要0.5~2ul，在檢測(cè)臺(tái)上,，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速,、微量、高濃度,、免石英管,、免毛細(xì)管等耗材檢測(cè)吸收值的優(yōu)點(diǎn)。此產(chǎn)品設(shè)計(jì)受保護(hù),，并在全普遍廣受歡迎,，其準(zhǔn)確度與便利性讓科學(xué)家得以更有效率進(jìn)行各項(xiàng)研究。

Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測(cè),，且不需要暖機(jī),，開機(jī)后立即使用。搭配高感度CCD array檢測(cè)器,，檢測(cè)吸收值可高達(dá)300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul）,，大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測(cè)。

      待測(cè)樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000的較為高要求,，一般核酸,、蛋白質(zhì)樣品能在檢測(cè)前以vortex mixer震勻?yàn)檩^為勻，若無(wú)vortex mixer也應(yīng)以pipette吸放數(shù)次混勻,。若擔(dān)心genomic DNA可能因前述動(dòng)作而斷裂,，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測(cè)前呈現(xiàn)均勻狀態(tài),，以確保 2ul 具有代表性,。

     檢測(cè)時(shí)選擇不同檢測(cè)模式，可以得到較為快速的結(jié)果：
● Nucleic Acid – 吸收光譜,、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）,、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度,。

● UV-Vis – 190~840nm間所有波長(zhǎng)的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現(xiàn)）,。

● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度,。僅適用于純化后的蛋白質(zhì),，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction coefficient）方可計(jì)算。

● BCA,、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長(zhǎng)吸收值結(jié)果,，自動(dòng)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square,，待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。

* 蛋白質(zhì)檢測(cè)模式目前提供BCA,、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑,，因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深，使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f(shuō)明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,，在較為快時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),，以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線較為多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品,，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品較為多可做五重復(fù),。

* 測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用 2ul，每個(gè)樣品檢測(cè)后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號(hào)： 34155 ）擦拭15~20回,，以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留,。

濃度范圍：

NanoDrop　ND-2000C

產(chǎn)品描述：

NanoDrop　ND-2000C為NanoDrop　ND-2000的升級(jí)版本,，ND-2000C具有ND-2000全部功能，除此之外,，它還有以下突出特點(diǎn)：

1、檢測(cè)耗時(shí)更短,，僅需3秒鐘；

2、具比色杯或者檢測(cè)孔兩種選擇,，適合檢測(cè)各種類型的樣本,，包括易揮發(fā)性物質(zhì)的檢測(cè),；

3、檢測(cè)范圍更加寬泛,，檢測(cè)下限可低至0.4 ng/μl （dsDNA）,；

4、內(nèi)置比色杯,，可進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)曲線研究,，或者OD600細(xì)胞濃度的測(cè)量,。

ND-2000C技術(shù)參數(shù)：

檢測(cè)孔測(cè)量時(shí):

  1,、波長(zhǎng)范圍: 190-840nm,；

  2,、波長(zhǎng)精度: 1nm；

3,、分辨率:<1.8 nm （FWHM at Hg 253.7 nm）,；

  4、其它: 1mm光程長(zhǎng)度（可自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）；

  5、檢測(cè)下限：2ng/μl（dsDNA）；

  6,、檢測(cè)上限：15000ng/μl（dsDNA）,；

  7,、吸光率度：0.002 absorbance （1mm光程）；

  8,、吸光率準(zhǔn)確性：2%（at 0.76 at 257 nm）,；

  9,、吸光率范圍：0.02-300 （相當(dāng)于10mm光程）,；

  10,、核酸檢測(cè)周期：< 5s；

  11、體積：14cm×20cm。

比色杯測(cè)量時(shí)：

1、光柱高度：8.5 mm,；

2、控溫,，37 ± 0.5 °C,；

3、攪拌速度: 150 – 850 rpm;

4,、四種光徑可供選擇,，分別為1，2,，5,，10mm；

5,、吸光率范圍：0.002 – 1.5,；

6,、檢測(cè)下限：0.4 ng/μl （dsDNA）；

7,、檢測(cè)上限：750 ng/μl （dsDNA）；

8,、檢測(cè)時(shí)間：< 3 s,；

9,、重量：2.1 kg.

二,、使用方法舉例

dsDNA：
在主畫面點(diǎn)選Nucleic Acid,，電腦與儀器自動(dòng)完成連線,。依照DNA所溶於之液體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認(rèn)DNA溶於二次水,、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂後再按Blank,。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50,，在Sample ID位置輸入樣品名稱,，將樣品混勻,，取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂後再按Measure,。點(diǎn)此觀看操作影片,。

結(jié)果：
DNA濃度即以 9.691 x 50 = 484.5 算出。 260/280介於1.8~2.0通常代表此為較純的DNA（隨DNA組成不同會(huì)有差異）,。 260/230高於260/280,，介於1.8~2.2通常表示純化過(guò)程殘留污染物較少。若欲察看220~340nm間其他波長(zhǎng)的吸收值,，可使用滑鼠拉動(dòng)位於230nm的直線,，或在右邊λ處輸入其他波長(zhǎng)數(shù)值。

三,、結(jié)果整理：
NanoDrop2000 軟體在偵測(cè)一開始會(huì)詢問(wèn)檔案欲存至何處,，若未，則檔案會(huì)存在上一個(gè)使用者的檔案內(nèi),。點(diǎn)此觀看或下載 Data 功能使用說(shuō)明,。

四、注意事項(xiàng)：
1. 偵測(cè)後立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺(tái)面,。先取一張將上下臺(tái)面的液體吸走,，再將此laboratory wipe吸過(guò)樣品的面反折到內(nèi)部，折疊四次後以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦 5次,，Protein 擦 20次）,。

2. 同一滴液體只能做一次偵測(cè)，欲重複定量同一樣品,，請(qǐng)擦掉前一滴,，重新取出一滴進(jìn)行偵測(cè)。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測(cè)量,，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求,，原則上不*過(guò) 2ul。並請(qǐng)使用2ul pipette避免體積不足導(dǎo)致液柱無(wú)法完整形成,。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性,，務(wù)必使用2ul進(jìn)行偵測(cè)。

4. 當(dāng)軟體跳出錯(cuò)誤訊息時(shí),，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀並依指示進(jìn)行障礙排除,。常發(fā)生的情形是在偵測(cè)過(guò)程液柱並未正確形成,，軟體會(huì)出現(xiàn)以下訊息?？上扔萌庋塾^察液柱是否未完整連接上下臺(tái)面,，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起後,，擦掉該滴樣品,，再重新進(jìn)行偵測(cè)，必要時(shí)可將樣品體積加大至2ul,。



正確的液柱應(yīng)為：



5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其他無(wú)腐蝕性之液體皆可使用,。



五,、日常與定期維護(hù)：

1.平時(shí)保持臺(tái)面及儀器本身清潔。

2.定期校正,。


常見問(wèn)題：
問(wèn) 1. 使用多少液體做測(cè)量,？
答 1. 2ul，基本上可使用 0.5~2ul 做測(cè)量,，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求,，原則上不*過(guò) 2ul。並請(qǐng)使用2ul pipette 避免體積不足導(dǎo)致液柱無(wú)法完整形成,。

問(wèn) 2. 如何清潔臺(tái)座,？
答2. 使用 laboratory wipe 將上下座的液體吸走，再將此 laboratory wipe 吸過(guò)樣品的面反折到內(nèi)部,，折疊四次後以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦 5次,，Protein 擦 20次）。點(diǎn)此觀看清潔臺(tái)座影片,。


問(wèn)3. 儀器多久需要校正,？
答3. 每臺(tái)儀器出廠前皆經(jīng)過(guò)多次測(cè)試，並附上測(cè)試報(bào)告,。新機(jī)一年校正一次,，之後建議每半年再進(jìn)行一次校正。本公司備有一年兩次的校正合約,，以原廠標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行定期校正,。若有特殊狀況亦可個(gè)案處理。

問(wèn)4. 燈源多久需要更換,？
答4.一般而言儀器內(nèi)一個(gè)氙氣燈可偵測(cè) 350萬(wàn)個(gè)樣品,，依供電及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境會(huì)有些微差異。若儀器在初始化時(shí)反覆出現(xiàn)錯(cuò)誤訊息,，請(qǐng)進(jìn)入Diagnostics內(nèi)進(jìn)行燈源強(qiáng)度確認(rèn),，若看不見任何光譜,，即為燈源壽終之訊息。

限制的免責(zé)聲明：本儀器僅限科研使用,。 非IVD醫(yī)療用途,。我司銷售皆為科研儀器，所售一切商品為非醫(yī)療器械,。