分光光度計測定核酸蛋白方法：

分光光度計蛋白質測定過程其實非常簡單,，先測試空白液,，然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,，一般要消除320 nm的“背景”信息,，設定此功能“開”。與測試核酸類似,，要求A 280的吸光值至少大于0.1A,，較為佳的線性范圍在1.0-1.5之間。實驗中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時,，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”,。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上,，只要觀察A 280的吸光值的變化范圍不*過1%,，表明結果非常穩(wěn)定。

漂移的原因是因為Warburg公式吸光值換算成濃度,，乘以一定的系數(shù),，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大,，從而顯得結果很不穩(wěn)定,。

核酸的定量是分光光度計使用頻率較為高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA,。核酸的較為高吸收峰的吸收波長260 nm,。 每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸,，事先要選擇對應的系數(shù)。如：1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,，37μg/ml的ssDNA,，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig,。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,，從而得出相應的樣品濃度,。測試前,，選擇正確的程序,，輸入原液和稀釋液的體積,，爾后測試空白液和樣品液,。然而,，實驗并非一帆風順,。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者較為頭痛的問題,。靈敏度越高的儀器,，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大,。

事實上，分光光度計的設計原理和工作原理,，允許吸光值在一定范圍內變化,，即儀器有一定的準確度和度。還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值,，離子濃度等：在測試時,，離子濃度太高，也會導致讀數(shù)漂移,，因此建議使用pH值一定,、離子濃度較低的緩沖液，如TE,，可大大穩(wěn)定讀數(shù),。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品,。這些小顆粒的存在干擾測試效果,。為了較為大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A,，吸光值在0.1-1.,。在此范圍內,，顆粒的干擾相對較小，結果穩(wěn)定,。

從而意味著樣品的濃度不能過低,，或者過高（*過光度計的測試范圍）。較為后是操作因素,，如混合要充分,，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負值,；混合液不能存在氣泡,，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈,；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,，否則濃度差異太大；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致,；不能采用窗口磨損的比色杯,；樣品的體積必須達到比色杯要求的較為小體積等多個操作事項,。

除了核酸濃度,，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如 A 260 / A 280的比值,，用于評估樣品的純度,，因為蛋白的吸收峰是 280 nm。純凈的樣品,，比值大于 1.8（DNA）或者2.0（RNA）,。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響,。A 230表示樣品中存在一些污染物,，如碳水化合物，多肽,，苯酚等,，較純凈的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子,。純樣品,，A 320 一般是 0。