日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

上海旦鼎國際貿易有限公司
中級會員 | 第15年

13564833058

艾本德
pcr儀 基因擴增儀
分子生物
電泳設備
IKA RCT Basic磁力攪拌器
顯微鏡|凝膠成像
培養(yǎng)箱|搖床
制冷設備|恒溫設備
光學儀器
食品檢測|農產品檢測儀
科晶
通用分析儀器
細胞分析
物理屬性
滅菌器|生物安全
電化學|水質測定儀
環(huán)衛(wèi)園林
土壤分析
藥物測定
無損檢測儀器
天平|衡量|力學
真空泵|循環(huán)泵|蠕動泵
樣品處理|離心|混合
過濾器|純水器
干燥箱|試驗箱|加熱設備
光度計
便攜式濁度儀
消解儀
甲醛測定儀
農藥殘毒檢測儀
溶氧儀
實驗室設備
環(huán)境監(jiān)測設備

熒光定量PCR方法介紹

時間:2015/1/28閱讀:2363
分享:

熒光定量PCR熒光為基礎對核酸進行定量分析,,其應用非常廣泛,可以用于檢測基因的表達量(RNA的豐度),,驗證表達譜芯片或轉錄組測序的數據,,確定病原體的載量,對片段的拷貝數(CNV)進行分析,對基因進行分型等等。其原理為通過監(jiān)控反應體系中熒光強度的變化,,記錄檢測熒光達到閾值時的循環(huán)數(Ct值),。從理論上說,起始模板量和Ct值密切相關,,因此我們通過判讀Ct值從而對樣本進行定量。熒光定量PCR從方法上來說可以分為染料法和探針法兩種。


染料法

在國內,,染料法一般采用DNA染料SYBRGreenⅠ,染料法使用簡單,,成本也相對較低,,因此會有很多國內研究者會選擇使用染料法進行后續(xù)實驗。在染料法熒光定量PCR實驗中,,染料能夠與雙鏈結合,,從而發(fā)光,而在游離狀態(tài)下,,SYBRGreen I發(fā)出微弱的熒光,。所以,一個反應發(fā)出的全部熒光信號與出線的雙鏈DNA量呈比列,,且會隨擴增產物的增加而增加,。

但是染料法檢測的是體系中的所有雙鏈DNA,,因此一些非特異性擴增或者引物二聚體的出現,會極大的影響真實結果的準確性,。為此,,一些廠商提供ROX作為內部熒光參考標準,用來校正背景,,但是即便如此,,染料法特異性的問題依舊無法與探針法相比。另外染料法無法在同一個反應中檢測多個目的片段,,對于復雜序列,,如果難以擴增的話,也會受到脫靶效應(如引物二聚體)的影響,。在這種情況下,,就需要在實驗前期進行熔解曲線分析,判斷擴增所得產物是否只有一種,。


TaqMan探針法

TaqMan探針法PCR擴增時,,在加入一對擴增引物的同時再加入一個特異性的熒光探針。Taqman探針為一段線性的寡核苷酸,,兩端分別標記一個熒光報告基團(FAM或Hex等)和一個熒光淬滅基團,,當探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,,PCR儀檢測不到熒光信號,;當PCR擴增時(在延伸階段),Taq酶的5' -3'外切酶活性將探針酶切降解,,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,,就有一個熒光分子形成,,實現了熒光信號的累積與PCR 產物形成*同步,這也就是探針法定量的原理,。

探針法與染料法的較為大區(qū)別在于,,理論上探針法中的熒光信號只來源于目標序列,也就是不受非特異性擴增及引物二聚體的影響,。除此之外,,人們還可以利用不同探針,在一個體系中使用不同的熒光標記同時檢測多種指標,,達到節(jié)省實驗成本的目的,。在樣本量比較大的情況下,成本甚至可以低于染料法,。

因此我們可以看到,,在選擇熒光定量實驗時,,探針法在特異性和準確性方面遠遠優(yōu)于廉價的染料法,但在實際使用時,,TaqMan探針高昂的價格常常讓人望而卻步,。目前,上海捷瑞生物工程有限公司在強大的探針合成能力的前提下,,推出了探針法熒光定量PCR服務,以染料法的價格,,享受探針法的服務,,在相同的經費情況下,提高實驗的準確性和特異性,。


上海旦鼎貿易有限公司

上海市浦東新區(qū)金橋路939號宏南投資大廈1110室

:  

:dandingmaoyi

:www.dookings,。。com

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏,!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言