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光是電磁波,波長(zhǎng)100nm~400nm稱(chēng)為紫外光, 400nm~780nm之間的光可被人眼觀(guān)察到,大子780nm稱(chēng)為紅外光,。人們只所以能夠看到色彩,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來(lái),。綠色植物之所以是綠色,,是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下,,檢測(cè)被測(cè)物的吸光值,。
檢測(cè)單位:
光通過(guò)被檢測(cè)物,前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,,特定波長(zhǎng)下,,同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測(cè)單位用OD值表示,, OD是optical delnsity(光密度)的縮寫(xiě),,表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),,其中trans為檢測(cè)物的透光值,。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度,, Ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度,Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度,。
OD值由下述公式計(jì)算:
E=OD=C×D×E
C為檢測(cè)物的濃度
D為檢測(cè)物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng),,在此波長(zhǎng)下,此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量,。如果選擇其它的波長(zhǎng)段,,就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,,在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),,我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),,稱(chēng)為測(cè)量波長(zhǎng)。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,,為了消除這種非特異性吸收,,我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng),以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性,。在參照波長(zhǎng)下,,檢測(cè)物光的吸收最小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收,。
Anthos 酶標(biāo)儀檢測(cè)值計(jì)算
儀器中的檢測(cè)器接收透過(guò)被檢測(cè)物的光能量,,轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào),最大為4095,。儀器定義沒(méi)有光源下的透光值為 0%,,沒(méi)有檢測(cè)物的透光值為100%。則實(shí)際檢測(cè)中,,檢測(cè)物的透光值均在 0%一100%之間,。透光值
的計(jì)算如下:
T=(Meas—Min)/(Max—Min)
其中T為透光值, Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,, Min為在 0%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,, Max為在100%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,舉例如下:
MaX=3600 Mn=20 Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552
Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位,,中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來(lái)檢測(cè)的不準(zhǔn)確,。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí),儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量,,選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值,。
光源的參照通道
參照通道是用來(lái)校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來(lái)的影響。
酶標(biāo)儀的用途和其它提示
用于ELISA試劑的測(cè)定,,廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室,,包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素,。請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行質(zhì)量控制,。
空白校正
有一些試劑盒的說(shuō)陰書(shū)將空白孔設(shè)置為空氣,其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來(lái)設(shè)置的,,請(qǐng)按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行,。
檢測(cè)結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,,檢測(cè)試劑的體積,,都會(huì)造成OD值的不,因此,,只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析,。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,。
酶標(biāo)儀的使用注意事項(xiàng)
1、工作環(huán)境
酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器,,因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,,還能夠延長(zhǎng)其使用壽命。根據(jù)DIN VDE 0871條例,,儀器應(yīng)放置在無(wú)磁場(chǎng)和干擾電壓的位置,。依據(jù)DIN 45 635 -19條例:
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學(xué)部件的老化,,應(yīng)避免陽(yáng)光直射,。
操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間,。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定,。
操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,,煙塵,。
保持干燥、干凈,、水平的工作臺(tái)面,,以及足夠的操作空間。
2,、操作注意事項(xiàng)
酶標(biāo)儀的功能是用來(lái)讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,,因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范,。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過(guò)目測(cè)判斷結(jié)果,,操作過(guò)程隨意性較大,在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣,,會(huì)造成較大誤差,。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng):
使用加液器加液,加液頭不能混用,。
洗板要洗干凈,。如果條件允許,使用洗板機(jī)洗板,,避免交叉污染,。
嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作,,反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確,。
在測(cè)量過(guò)程中,請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板,,以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手,。
請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,,操作完成后請(qǐng)洗手。
如果使用的樣品或試劑具有污染性,、毒性和生物學(xué)危害,,請(qǐng)嚴(yán)格按照試
劑盒的操作說(shuō)明,以防對(duì)操作人員造成損害,。
如果儀器接觸過(guò)污染性或傳染性物品,,請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。
不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源,。
對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差,,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù),以達(dá)到最佳效果,。
使用后蓋好防塵罩,。
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