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微量分光光度計原理及應用
微量分光光度計能夠快速準確的定量檢測核酸、蛋白質(zhì)等溶液,。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl),、不用預熱,、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置,、樣品不需要稀釋等特點，常用于核酸,，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量,，目前已成為眾多實驗室的常規(guī)儀器。
工作原理
超微量分光光度計進行濃度測定的原理是根據(jù)朗伯-比爾（Lamber-Beer）定律,，
A＝K·C·L
式中,，A為吸光度；K為吸（消）光系數(shù)；C為溶液的濃度,；L為液層厚度,。此公式說明：在入射光一定時，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比,。此式就是光的吸收定律的數(shù)學表達式,，又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能,?？梢远繙y定溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈,、雙鏈DNA以及RNA含量,。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,，具有紫外吸收的特性,，最大的吸收波長在260nm，吸收波谷在230nm,。
除了核酸濃度,，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值,，用于評估樣品的純度,，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）,。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。A230表示樣品中存在一些污染物,，如碳水化合物，多肽,，苯酚等,，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質(zhì)直接定量
這種方法是在280nm波長,，直接測試蛋白,。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈,、成分相對單一的蛋白質(zhì),。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快,，操作簡單,；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,，如DNA的干擾；另外敏感度低,，要求蛋白的濃度較高,。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸（如酪氨酸,，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應,，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),，從而反應蛋白質(zhì)濃度,。
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