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夾芯式垂直電泳槽使用方法

時(shí)間:2023/8/9閱讀:1026
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一,、組成部件
(一)裝有鉑金絲的貯液槽一對(duì),配有冷卻裝置及電泳緩沖液流出口,。 
(二)凹型橡膠框,,配有玻璃板,,可分別制作厚度為lmm、1.5mm的凝膠板,,操作時(shí)根據(jù)需要選擇適當(dāng)厚度的玻璃板及梳子配套使用,。
(三)樣品孔模具(梳子)用于電泳加樣。 
(四)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對(duì),,28D,、30型為5對(duì)。 
(五)橡膠管五根,。兩根長(zhǎng)的用于連接冷卻水的出入口,;中等長(zhǎng)度的兩根用于連接電極緩;中液的流出口,;*短的一根用于連接貯液槽間的冷卻水,。
(六)導(dǎo)線1付。
● 二,、使用方法
(一)清洗部件
上述部件組裝前要徹清洗干凈,。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框,必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑徹清洗干凈,。清洗后的玻璃板應(yīng)放在玻璃板支架上晾干水后方能使用,。
(二)組裝電泳槽
A、1,、將四只固定螺桿插到一只貯液框(半上槽)的相應(yīng)孔洞中,,然后將貯液框仰放在桌上。
2,、左手拿凹型槽橡膠??颍沂值哪粗概c中指握住玻璃板的兩側(cè)邊緣插到橡膠??騼?nèi) (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板),。
3、將帶有玻璃的橡膠??蜃臃旁谘龇诺馁A液槽框架上,,其下緣必須對(duì)齊貯液槽框下緣。
4,、雙手拿另一只貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合,,并使橡膠框上的凸出線位于貯液槽有機(jī)玻璃框中央。
5,、裝上四只螺母

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,,擰緊螺絲。注意擰緊螺絲時(shí)用力應(yīng)均勻,,*好用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊,。
6、將電泳槽垂直豎起,,放在桌上,,帶短玻璃板的貯液槽稱上槽(陰端),帶長(zhǎng)玻璃板的貯液槽稱為下槽(陽端),,在長(zhǎng)玻璃板與橡膠框間有一縫隙,。此縫隙可用已熔化的10%瓊脂沿長(zhǎng)玻璃板下端灌入,為防止留存氣泡,,可稍抬起一端即可趕去氣泡,。待瓊脂全凝固后才能灌膠。
B,、也可將槽垂直豎起,,將帶有玻璃的橡膠模框直接放入槽中,,對(duì)稱擰緊螺絲后,,用瓊脂封底邊。
(三)灌膠
1,、先灌分離膠,,待凝固后再灌濃縮膠。灌膠前接通冷卻水,,夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管,。
2、用細(xì)頭滴管吸取膠液,,沿長(zhǎng),、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液。為防止產(chǎn)生氣泡,,可稍拾起另一端(氣泡往高處走),,不斷加入膠液。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處,,輕輕加少許水,,雙手輕輕將梳子插入,待膠凝后就可形成凹形加樣孔,。 
3,、為防止漏膠,在上,、下貯液槽中立即加入蒸餾水,,但蒸餾水不能超過短玻璃板上緣。
4,、膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折
射率不同的亮區(qū),。
(四)加樣
1,、松開連接上、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子,,放掉槽內(nèi)的蒸餾水,,待水流完后,再夾緊夾子,。
2,、雙手輕輕取出樣品梳子,即可看到界線清楚的加樣孔,,將孔中水分吸去(注意千萬不要碰壞孔沿的字面),。
3、在上,、下貯液槽中加入緩,;中液,液體高度應(yīng)超過上貯液槽短玻璃板上緣,。
4,、用微量注射器吸取一定量的樣品加到長(zhǎng)、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(nèi)(注意加樣動(dòng)作要輕,,針頭不能碰壞膠面),。
(五)電泳
一貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的負(fù)極相連,下貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的正極相連,。檢查線路無誤,,方可按照所要求的電壓電流進(jìn)行電泳。
(六)取出膠板
電泳結(jié)束,,旋松螺母,,取出膠框,剝出玻璃板,,在兩塊玻璃板下角空隙內(nèi),,用刀片背面輕輕撬動(dòng),即可將膠面與一塊玻璃板分開,,將有膠板的玻璃板平放在桌上,,雙手輕輕沿凝膠底將膠片托起,放在大培養(yǎng)皿中染色,,膠板經(jīng)漂洗,、脫色后即可看到清晰的分離條帶。

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