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PCR儀的種類】
分類總是五花八門,,總體來說可以分為PCR擴(kuò)增儀和實(shí)時熒光PCR儀兩大類,,有人也把它們稱為半自動和全自動,或者定性和定量,,都是比較不準(zhǔn)確的稱呼,。
PCR最重要的就是個升降溫過程,最初的水浴鍋式PCR,,就是三個水浴箱,,一個機(jī)械臂,定時抓出反應(yīng)槽轉(zhuǎn)換水浴鍋,。這種東東體積大,,迅速慢,但其實(shí)結(jié)果并不比以后的PCR儀差,,我現(xiàn)在都很欣賞,。后來有人利用致冷和加熱做成了,固定位置升降溫的PCR擴(kuò)增儀,。
后來隨著定量技術(shù)的發(fā)展,,有公司將擴(kuò)增儀和檢測做成一體,也就成了現(xiàn)在所謂的全自動(或定量)PCR儀,。當(dāng)然標(biāo)準(zhǔn)的叫實(shí)時熒光定量PCR儀,。
【品牌】
什么東西都有品牌,現(xiàn)在國內(nèi)國外PCR儀的品牌很多,,就國外而言比較著名的有:
ABI美國應(yīng)用生物公司:老牌的生物公司貴族,,其收購了原來的PE,而PE公司是PCR的*,,旗下有很多經(jīng)典的PCR儀,,有5700(已停產(chǎn))、7700(已停產(chǎn))、7000,、7900等實(shí)時熒光定量PCR儀,。
ROCHE羅氏診斷:炙手可熱的新貴,LIGHTCYCLER是其的PCR儀,,市場做得很不錯,,以科研定位為主,但在國內(nèi)很多醫(yī)院使用,,其很特色離心,、氣加熱、毛細(xì)管等,,設(shè)計另類,,是最有特色的PCR儀,當(dāng)然好壞另議,,就單其另辟蹊徑的技術(shù)能力和膽識就值的佩服,。
MJ:剛?cè)胫袊拿鳎琈J的擴(kuò)增儀在生命科研領(lǐng)域比較出名,,其產(chǎn)品比較適合高通量檢測,,人類基因組計劃用得很多。其實(shí)時熒光PCR儀剛進(jìn)入中國不久,,孔間能使用不同溫度是其特色,。這點(diǎn)其實(shí)比較有用。
伯樂:呵,,廉價的麥當(dāng)勞,,ICYCLER是其主打,進(jìn)入中國已經(jīng)比較久了,,產(chǎn)品和5700一樣,,是擴(kuò)增儀上加裝定量模塊而成,特點(diǎn)是價格較低,。
國內(nèi)現(xiàn)在做的也很多,,比如杭州博日、杭州朗基,、上海楓嶺,、廈門安普利等。
【選購】
準(zhǔn)確的講包括實(shí)時熒光定量在內(nèi)都沒有自動加樣和標(biāo)本處理系統(tǒng),,只能算半自動的,。PCR儀是個簡單的東東,一個溫控設(shè)備和一個檢測設(shè)備而已,。
關(guān)于溫控,,主要是介質(zhì)問題。理想的介質(zhì)是導(dǎo)熱性好、比熱大,、接觸緊密的東東,。
這方面好的是水浴和油浴,比熱大(油比水更大),、溶劑化物體,,與反應(yīng)物無縫接觸,效果當(dāng)然最好,。但是自動化,,小型化難,只有最初的水浴鍋式使用,。
硅加熱,,這是使用普遍的一種,優(yōu)點(diǎn):易自動化,、速度快,、直接加熱降溫,效果當(dāng)然好,,但是第一成本較高,第二其使用的介質(zhì)是金屬,,導(dǎo)熱雖然好,,但是與反應(yīng)管,很難做到無縫接觸,,定性時代可以加油,,但用熒光定最,由于油有熒光信號不能用,。所以在無縫接觸上差一些,。第三由于是底部加熱,下部壓力較大,,有溢出的可能,,不過新的儀器在加熱蓋以后解決了這個問題。
空氣加熱,,用空氣做介質(zhì)有優(yōu)點(diǎn),,與反應(yīng)體系無縫接觸,但是空氣的導(dǎo)熱性差,、比熱小的弱點(diǎn)明顯,。因此空氣加熱的要利用離心來產(chǎn)生空氣流動,增強(qiáng)導(dǎo)熱性,,同時使用毛細(xì)管,,加大接觸面積、試劑微量化來彌補(bǔ)。這樣做了以后效果還是不錯,。但有的廠商把什么離心,、毛細(xì)管的好處大講特講,對氣加熱的弱點(diǎn)閉口不談,,卻是高明的市場手法,。同時,使用離心,,對標(biāo)本量增大是有影響的并且標(biāo)本量越大,,空氣比熱小的弱點(diǎn)就越明顯,所以空所加熱的儀器標(biāo)本量都比較小,。使用毛細(xì)管后由于反應(yīng)液與管的接觸面積增大,,吸附現(xiàn)象更大,因此試劑的通用性差一般要專門開發(fā),,成本高,,雖然試劑用量少,但因?yàn)槭菍S迷噭?,每人份就是以?shí)際量算,,并不省試劑。反而增加了毛細(xì)管成本,。
關(guān)于功能,,所有的PCR儀功能都大體相同。只有MJ孔間能使用不同溫度比較有特點(diǎn),,這對于多項(xiàng)目同時檢測以及循環(huán)參數(shù)的調(diào)整比較有用,。但其實(shí)時熒光的儀器剛進(jìn)入中國不久,具體如何還不得而知,。
關(guān)于選購,,根據(jù)單位情況而定,由于PCR的技術(shù)含量其實(shí)并不高,,好的國產(chǎn)儀器如杭州博日(與日本著名廠商大和有關(guān))也差不太多,。關(guān)于進(jìn)口儀器,羅氏的儀器不錯,,但如果標(biāo)本量大,,建議不要用羅氏。一則會累死的,。另外,,每個標(biāo)本要分?jǐn)偟臉?biāo)準(zhǔn)曲線、對照成本太高,。同時,,試劑也比較受限,。
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