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微量分光光度計原理及應用
微量分光光度計能夠快速準確的定量檢測核酸,、蛋白質(zhì)等溶液,。具有使用方便,、消耗樣品少(僅2μl)、不用預熱,、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置,、樣品不需要稀釋等特點,，常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量,，目前已成為眾多實驗室的常規(guī)儀器,。
工作原理
超微量分光光度計進行濃度測定的原理是根據(jù)朗伯-比爾（Lamber-Beer）定律，
A＝K·C·L
式中,，A為吸光度；K為吸（消）光系數(shù),；C為溶液的濃度,；L為液層厚度。此公式說明：在入射光一定時,，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比,。此式就是光的吸收定律的數(shù)學表達式，又叫朗伯-比爾定律,。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能,。可以定量測定溶于緩沖液的寡核苷酸,，單鏈,、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸,、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波長在260nm,，吸收波谷在230nm,。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,，如A260/A280的比值,，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm,。純凈的樣品,，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0,，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物,，多肽,，苯酚等,，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質(zhì)直接定量
這種方法是在280nm波長,，直接測試蛋白,。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈,、成分相對單一的蛋白質(zhì),。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快,，操作簡單,；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾,；另外敏感度低,，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸（如酪氨酸,，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應，產(chǎn)生有色物質(zhì),。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),，從而反應蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA,，Bradford,，Lowry 等幾種方法。
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