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探討PCR電泳無條帶原因

時間:2023/4/16閱讀:993
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可能的原因及對應(yīng)的解決方案如下:

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酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或運輸不當(dāng)而失活,,往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果,。

模板含有雜質(zhì),。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,,造成 DNA 脫嘌呤而影響 PCR 的結(jié)果。

變性溫度是否準(zhǔn)確:PCR 儀指示溫度與實際溫度是否相符,,過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活,;過低則模板變性不底。

反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶,,應(yīng)在未加 Taq 酶以前,,將反應(yīng)體系 95℃ 加熱 5~10 分鐘。

引物變質(zhì)失效,。人工合成的引物是否正確,。是否純化,或因儲存條件不當(dāng)而失活,。

引物錯誤,。利用 BLAST 檢查引物特異性或重新設(shè)計引物。

DNA 凝膠電泳時加入陽性對照,,確保不是 DNA 凝膠和 PCR 程序的問題,。

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