測量細(xì)胞電阻和電壓
一. 物品準(zhǔn)備(在超凈臺(tái)中準(zhǔn)備如下物品)
1.
*充好電的Millicell ERS-2系統(tǒng)
2.
STX04測試電極
3.
STX01或者STX03電極 (用于檢測Millicell 6, 12和24孔板), STX00電極(用
于檢測Millicell 96孔板),如果要測量電壓則要*行電極平衡
4.
未培養(yǎng)細(xì)胞的Millicell培養(yǎng)皿(對(duì)照)
5.
培養(yǎng)了細(xì)胞的Millicell培養(yǎng)皿
6.
70%的乙醇
7.
3/32”平頭螺絲刀
二. 電極滅菌
電極是非無菌的,我們建議使用乙醇滅菌,,也可以用環(huán)氧乙烷,、紫外線或者
殺菌劑滅菌。不能使用高溫或者火焰滅菌,,因?yàn)殡姌O無法承受高溫。乙醇滅
菌流程如下:
1.
將電極插入70%乙醇浸泡15min進(jìn)行滅菌,,取出電極風(fēng)干15秒,;注意:
不能將電極浸入乙醇中超過30min,,這會(huì)損壞電極的保護(hù)層,縮短其使
用壽命,。
2.
用與培養(yǎng)基相似的電極液(或者0.1-0.15M NaCl/KCl)沖洗電極,;
3.
若是進(jìn)行電阻測量,此時(shí)電極已可以使用,;
4.
若是進(jìn)行電壓測量,,將電極在與培養(yǎng)基相似的無菌電極緩沖液中平衡15
分鐘。注意:為了保持無菌,,可以將電極放在紫外燈下短時(shí)間照射,。
三. 電阻測量(量程:0-9999Ω,靈敏度:1Ω)
注意:雖然儀表量程能夠達(dá)到13,000Ω,,但是10,000Ω及以下的讀數(shù)才具準(zhǔn)確
性,。
1.
將細(xì)胞置于室溫下平衡30分鐘;
2.
如前所述,,測試Millicell ERS-2系統(tǒng),;
3.
確保儀表與充電器斷開;
4.
將模式打到Ohms,,開關(guān)打到ON,;
5.
將電極短端浸入培養(yǎng)板內(nèi)部,長端浸入外部,。
短端不要碰到小室膜上生長的細(xì)胞,,長端需碰到外
側(cè)孔的底部。為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定和可重復(fù)性,,
確保電極平穩(wěn),,并與培養(yǎng)板成90°;
6.
記錄電阻值,。