電泳儀:電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究*的重要分析手段,。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類,,自由界面電泳不需支持物,,如等電聚焦電泳,、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,,這類電泳目前已很少使用,。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物,常用的支持物有濾紙,、醋酸纖維薄膜,、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,,分子生物學(xué)領(lǐng)域中*常用的是瓊脂糖凝膠電泳,。所謂電泳,是指帶電粒子在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng),,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,,因此在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)速度不同,根據(jù)這一特征,,應(yīng)用電泳法便可以對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析,,或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組份分析或單個(gè)組份提取制備,這在臨床檢驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)研究中具有極其重要的意義,。電泳儀正是基于上述原理設(shè)計(jì)制造的,。下面簡(jiǎn)單介紹其使用方法及注意事項(xiàng)。
● 使用方法
1. 首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接,注意極性不要接反,。
2. 電泳儀電源開(kāi)關(guān)調(diào)至關(guān)的位置,,電壓旋鈕轉(zhuǎn)到*小,根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍,。
3. 接通電源,,緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止,設(shè)定電泳終止時(shí)間,,此時(shí)電泳即開(kāi)始進(jìn)行,。
4. 工作完畢后,應(yīng)將各旋鈕,、開(kāi)關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài),,并撥出電泳插頭。
注意事項(xiàng)
1. 電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后,,禁止人體接觸電極,、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內(nèi)取放東西,,如需要應(yīng)先斷電,,以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端,,以防漏電,。
2. 儀器通電后,不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭,,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,,雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞,。
3. 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同,,電泳時(shí)所通過(guò)的電流量也不同,其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同,,故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行,。
4. 在總電流不超過(guò)儀器額定電流時(shí)(*大電流范圍),可以多槽關(guān)聯(lián)使用,,但要注意不能超載,,否則容易影響儀器壽命。
5. 某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時(shí),,允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開(kāi)機(jī),,但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開(kāi)機(jī),否則電壓表指針將大幅度跳動(dòng),,容易造成不必要的人為機(jī)器損壞,。
6. 使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異?,F(xiàn)象,如較大噪音,、放電或異常氣味,,須立即切斷電源,進(jìn)行檢修,,以免發(fā)生意外事故,。
夾芯式垂直電泳槽使用方法:
一、組成部件
(一)裝有鉑金絲的貯液槽一對(duì),,配有冷卻裝置及電泳緩沖液流出口,。
(二)凹型橡膠框,配有玻璃板,,可分別制作厚度為lmm,、1.5mm的凝膠板,操作時(shí)根據(jù)需要選擇適當(dāng)厚度的玻璃板及梳子配套使用,。
(三)樣品孔模具(梳子)用于電泳加樣,。
(四)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對(duì),28D,、30型為5對(duì),。
(五)橡膠管五根,。兩根長(zhǎng)的用于連接冷卻水的出入口,;中等長(zhǎng)度的兩根用于連接電極緩;中液的流出口,;*短的一根用于連接貯液槽間的冷卻水,。
(六)導(dǎo)線1付。
● 二,、使用方法
(一)清洗部件
上述部件組裝前要*清洗干凈,。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框,必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑*清洗干凈,。清洗后的玻璃板應(yīng)放在玻璃板支架上晾干水后方能使用,。
(二)組裝電泳槽
A、1,、將四只固定螺桿插到一只貯液框(半上槽)的相應(yīng)孔洞中,,然后將貯液框仰放在桌上。
2,、左手拿凹型槽橡膠??颍沂值哪粗概c中指握住玻璃板的兩側(cè)邊緣插到橡膠??騼?nèi) (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板),。
3,、將帶有玻璃的橡膠模框子放在仰放的貯液槽框架上,,其下緣必須對(duì)齊貯液槽框下緣,。
4、雙手拿另一只貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合,,并使橡膠框上的凸出線位于貯液槽有機(jī)玻璃框中央,。
5、裝上四只螺母,,擰緊螺絲,。注意擰緊螺絲時(shí)用力應(yīng)均勻,*好用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊,。
6,、將電泳槽垂直豎起,放在桌上,,帶短玻璃板的貯液槽稱上槽(陰極),,帶長(zhǎng)玻璃板的貯液槽稱為下槽(陽(yáng)極),在長(zhǎng)玻璃板與橡膠框間有一縫隙,。此縫隙可用已熔化的10%瓊脂沿長(zhǎng)玻璃板下端灌入,,為防止留存氣泡,可稍抬起一端即可趕去氣泡,。待瓊脂*凝固后才能灌膠,。
B、也可將槽垂直豎起,,將帶有玻璃的橡膠??蛑苯臃湃氩壑校瑢?duì)稱擰緊螺絲后,,用瓊脂封底邊,。
(三)灌膠
1、先灌分離膠,,待凝固后再灌濃縮膠,。灌膠前接通冷卻水,夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管,。
2,、用細(xì)頭滴管吸取膠液,沿長(zhǎng),、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液,。為防止產(chǎn)生氣泡,可稍拾起另一端(氣泡往高處走),,不斷加入膠液,。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處,,輕輕加少許水,雙手輕輕將梳子插入,,待膠凝后就可形成凹形加樣孔,。
3、為防止漏膠,,在上,、下貯液槽中立即加入蒸餾水,但蒸餾水不能超過(guò)短玻璃板上緣,。
4,、膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折
射率不同的亮區(qū)。
(四)加樣
1,、松開(kāi)連接上,、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子,放掉槽內(nèi)的蒸餾水,,待水流完后,,再夾緊夾子。
2,、雙手輕輕取出樣品梳子,,即可看到界線清楚的加樣孔,將孔中水分吸去(注意千萬(wàn)不要碰壞孔沿的字面),。
3,、在上、下貯液槽中加入緩,;中液,,液體高度應(yīng)超過(guò)上貯液槽短玻璃板上緣,。
4,、用微量注射器吸取一定量的樣品加到長(zhǎng)、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(nèi)(注意加樣動(dòng)作要輕,,針頭不能碰壞膠面),。
(五)電泳
一貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的負(fù)極相連,下貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的正極相連,。檢查線路無(wú)誤,,方可按照所要求的電壓電流進(jìn)行電泳。
(六)取出膠板
電泳結(jié)束,,旋松螺母,,取出膠框,剝出玻璃板,,在兩塊玻璃板下角空隙內(nèi),,用刀片背面輕輕撬動(dòng),,即可將膠面與一塊玻璃板分開(kāi),將有膠板的玻璃板平放在桌上,,雙手輕輕沿凝膠底將膠片托起,,放在大培養(yǎng)皿中染色,膠板經(jīng)漂洗,、脫色后即可看到清晰的分離條帶,。