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在生命科學研究中,離心是一種*的技術手段,,更是實驗室中常見的實驗項目,。但是你真的了解這門技術嗎?你是否知道離心的原理,,了解如何選擇合適的轉頭,、離心管和離心方法呢?小貝離心課堂重新開課,,帶你玩轉離心機,,快來加入我們吧!
離心原理
學習一門技術勢必要先從了解其原理開始,。我們可以通過簡單的實驗來理解離心的基本原理,。
首先我們來觀察在重力作用下顆粒的沉降:抓一把沙子和泥土的混合物放到裝有水的容器里搖勻,,然后把容器置于桌上,,觀察到在地球引力作用下大量的顆粒立即沉淀到容器的底部。一段時間后,,又看到容器中的混合物分成數(shù)層,,每層都由大小相同的顆粒組成,顆粒在容器的分布從上到下逐漸增大,。不過,,仍然會有一些細小的顆粒在水中緩慢的向容器底部移動,由于移動得非常緩慢,,我們不一定能觀察到這些顆粒的運動,。另外還有一些顆粒則漂浮在水面上。
通過實驗中觀察到的結果,,我們可以得出大顆粒比小顆粒更快地沉降到底部,,而更小的顆粒則沉降得更慢,。不過,一些密度比較重的小顆粒反而比密度比較輕的大顆粒沉降得更快,。我們還可以看到有些小顆粒在水中是不沉降的,,漂浮在水面。
圖1 重力作用下混合顆粒的沉降:顆粒沉降的速度依賴于顆粒的大小,,大顆粒則先沉降到底部,,而小顆粒則停留在容器的上部。
以上即是離心的主要原理,,液體中的顆粒在重力的作用下以一定的速率向下移動,,顆粒移動的速率往往與顆粒的大小與密度相關,這樣就出現(xiàn)了顆粒的沉降運動,。當然前提是顆粒的密度必須大于液體的密度,。
總結來說,離心技術是利用離心機旋轉運動產(chǎn)生離心力,,將具有沉降系數(shù)差別的樣品進行分離,、分析、濃縮和提純的一種技術,。
離心常用術語
離心力和相對離心力
盡管有些生物顆??梢栽谥亓觯?×g)作用下實現(xiàn)分離,如人血細胞,,將處理過的血細胞置于桌上1-2 小時,,由于不同細胞的大小不一樣,白細胞和紅細胞能自動分層,。但若需分離更小的生物顆粒,,遠大于重力的力則是必須的,這可以通過沿軸旋轉裝有懸浮顆粒的離心管來實現(xiàn),。顆粒在放射狀的離心力下從軸心向外運動,,使離心管旋轉的機器就是離心機,而裝載了離心管并帶動離心管沿軸旋轉的即是轉頭,。不管是細胞還是生物大分子受到離心力都可以用以下公式計算:
(1)
F離心力– 顆粒受到的離心力
m – 顆粒的質量
ω – 角速度
r – 旋轉軸到顆粒的距離
但是通常情況下,,旋轉的轉頭受到的放射狀的力都是由相對離心力(RCF:Relative centrifugation force)來衡量的。而所謂的相對離心力即是離心力與重力之比,,用以下公式
表示:
(2)
RCF – 相對離心力,;
F離心力– 顆粒受到的離心力;
F重力– 顆粒受到的重力,;
m – 顆粒的質量,;
ω – 角速度;
g –重力加速度,;
r – 旋轉軸到顆粒的距離,。
ω 是轉頭的角速度,,指轉頭每秒鐘轉過的弧度數(shù),其值就是:
(3)
RPM (Revolution per minute) – 轉頭每分鐘轉過的轉數(shù)
結合公式(2)和公式(3)可得到同一轉頭的轉速與相對離心力之間的關系:
(4)
r – 旋轉軸到顆粒的距離(單位:毫米mm)
由上可以看出轉頭的相對離心力與轉頭的轉速的平方成正比,,而且與轉頭的半徑成正比,。對于同一轉頭而言,由于半徑不變,,增加轉速也就相當于提高了相對離心力。
為便于進行轉速和相對離心力之間的換算,,Dole 和Cotzias 利用RCF 的計算公式,,制作了轉速“rpm”、相對離心力“RCF”和旋轉半徑“r”三者關系的列線圖,,圖式法比公式計算法方便,,且一目了然。換算時,,先在r 標尺上取已知的半徑和在rpm 標尺上取已知的離心機轉數(shù),,然后將這兩點間劃一條直線,與圖中RCF 標尺上的交叉點即為相應的相對離心力數(shù)值,。
上圖轉速與半徑相對應的離心力列線圖,,左列為半徑標尺,右列為轉速標尺,,連接半徑與轉速的直線與中間RCF 表尺的交匯點,,就可得到相對離心力。注意,,若已知的轉數(shù)值處于rpm 標尺的右邊,,則應讀取RCF 標尺右邊的數(shù)值,轉數(shù)值處于rpm 標尺左邊,,則應讀取RCF 標尺左邊的數(shù)值,。
在重力場的沉降中,重力場通常被看作恒定值,,而離心管中的離心力場卻不是一個恒定值,。由于轉頭的形狀及設計,離心管中從管頂至管底各點到旋轉中心的距離是不同的,,為了計算相對離心力的數(shù)值可用平均相對離心力來表示,,即同一離心轉頭部和底部所受離心力的平均值??萍嘉墨I中離心力的數(shù)據(jù)通常是指其平均值(RCFav),,即離心管中點的離心力。
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