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數(shù)字PCR在癌癥早篩和微小殘留病灶檢測的應(yīng)用

時間:2020/2/15閱讀:3254
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近幾十年的大量研究表明,,在許多血液系統(tǒng)惡性腫瘤中,,微小殘留病灶(MRD)與臨床結(jié)果及預(yù)后顯著相關(guān),。癌癥中MRD是指癌癥治療達(dá)到*緩解后,,用常規(guī)的形態(tài)學(xué)檢測方法不能檢測到明顯的癌病灶,而此時體內(nèi)仍存在的少量癌細(xì)胞,。微小殘留病灶是腫瘤復(fù)發(fā)的直接原因,。


目前應(yīng)用廣泛精確的MRD檢測手段是通過取患者的血液,對其中的循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)進(jìn)行檢測,,這種方法也叫做液體活檢(liquid biopsy),,它可以獲取患者腫瘤病變信息,用以幫助診斷治療,。

臨床研究主要是基于聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的方法對淋巴疾病的MRD進(jìn)行評估,。一篇描述PCR在淋巴瘤MRD檢測中的臨床研究由Gribben JG在1991年發(fā)表。隨后又引入了基于TaqMan的實(shí)時PCR(qPCR),,它可以定量分子靶標(biāo),。目前,,qPCR是用于MRD檢測的標(biāo)準(zhǔn)化方法,但該方法有一定的局限性,,由于MRD本身的特征,,常規(guī)的qPCR在檢測時往往達(dá)不到理想的效果。

為了克服標(biāo)準(zhǔn)分子技術(shù)的一些缺陷,,需要高精度,、高通量的MRD檢測工具,數(shù)字PCR技術(shù)作為第三代PCR技術(shù),,在靈敏度以及準(zhǔn)確性度上遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于qPCR,。如一篇文章中報道,研究人員利用數(shù)字PCR以及二代測序技術(shù)對淋巴增生性疾病MRD進(jìn)行監(jiān)測,,探究其在液體活檢方面的可行性,。  

在本篇文章中,研究人員發(fā)現(xiàn)與qPCR相比,,數(shù)字PCR在進(jìn)行MRD研究中具有許多實(shí)用優(yōu)勢。數(shù)字PCR無需依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行樣品定量,,可以避免因反應(yīng)效率波動而導(dǎo)致的結(jié)果差異,,使那些由于診斷時腫瘤負(fù)荷低而無法生成可靠的標(biāo)準(zhǔn)曲線的患者得以康復(fù)。而且,,它可以幫助節(jié)省寶貴診斷時間,。
此外,文章報道了數(shù)字PCR技術(shù)在其他惡性血液病的MRD評價方面取得了較大進(jìn)展,。例如,,在慢性髓系白血病中,與標(biāo)準(zhǔn)qPCR相比,,數(shù)字PCR在低轉(zhuǎn)錄水平樣本的檢測上更加準(zhǔn)確,。
本研究表明,數(shù)字PCR可能會改變當(dāng)前的MRD監(jiān)測方法,,從而使將來的試驗(yàn)可以更好地表征血液系統(tǒng)疾病,,幫助研究人員開發(fā)出MRD檢測的個性化方法。法國Stilla Technologies的Naica微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng),,利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的耗材,。樣品通過毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個微滴的形式進(jìn)入2D芯片中。并且還是3色熒光檢測儀器,,整個流程只需要兩個半小時,。結(jié)合強(qiáng)大的圖像分析技術(shù)和直觀可視的檢測功能,從而達(dá)到了數(shù)字PCR定量的置信水平,,獲得的數(shù)據(jù)真實(shí)可信,。

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