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蛋白質(zhì)的雙向電泳的向?yàn)榈入娋劢梗↖soelectrofocusing, IEF）,根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行分離；第二向?yàn)镾DS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）,，按亞基分子量大小進(jìn)行分離,。經(jīng)過(guò)電荷和分子量?jī)纱畏蛛x后,，可以得到蛋白質(zhì)分子的等電點(diǎn)和分子量信息,。
注意事項(xiàng)：
1. 一向聚焦與二向電泳之間需要平衡,，時(shí)間視蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定,，一般為10min,，多不*過(guò)15min。
2. 過(guò)量的上樣量會(huì)引起雙向圖形畸形,，特別在一向聚焦時(shí),，當(dāng)樣品濃度*過(guò)5mg時(shí)，則蛋白質(zhì)凝聚和沉淀,，使二向時(shí)產(chǎn)生水平和垂直條紋,。
3. 含尿素的試劑均應(yīng)避免過(guò)高的溫度處理，一般不要*過(guò)30℃,，否則尿素分解產(chǎn)生異硫氰酸鹽會(huì)引起羧基甲?；鴮?dǎo)致電荷不均一性。
4. 向中過(guò)量的去污劑會(huì)嚴(yán)重影響雙向電泳圖譜,，因此聚焦完畢進(jìn)行平衡前,，用雙蒸餾水沖洗膠條，以除去殘留的去污劑,。
5. 雙向電泳中雙向凝膠間的界面緊密接觸非常重要,，如果接觸不好或者兩者之間留有氣泡，則導(dǎo)致轉(zhuǎn)移時(shí)分子擴(kuò)散,。
6. 雙向電泳中的條紋現(xiàn)象是常見(jiàn)的問(wèn)題,。水平條紋可能與一向電泳時(shí)間不夠，聚焦不好有關(guān),，或者在加樣處產(chǎn)生沉淀和引起重新溶解所致,；縱向條紋則表明樣品沒(méi)*溶解，這可以通過(guò)調(diào)整樣品量,，增加電泳時(shí)間,，改善樣品的溶解狀態(tài)，同時(shí)在加樣前通過(guò)高速離心以除掉所有不溶物,。
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