分光光度計(jì)是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收進(jìn)行物質(zhì)的定性或定量分析的儀器，在各行各業(yè)得到了廣泛應(yīng)用,，主要用于物質(zhì)純度檢查,、定量分析,、物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒別等?？蓽y量結(jié)果總會(huì)出現(xiàn)可接受或不可接受的誤差,，誤差來源于測量過程的各個(gè)方面，我認(rèn)為主要來源于儀器本身性能和測量條件的選擇兩個(gè)方面,。

一,、儀器本身性能帶來的誤差

1.雜散光的影響

雜散光是指進(jìn)人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分，它是光譜測量中誤差的主要來源,。產(chǎn)生原因有:分光光度計(jì)的色散元件,、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等,。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長處,，由于單色器透光率、光源輻射強(qiáng)度,、檢測器靈敏度都較低,，雜散光的影響更為顯著,。雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測量誤差，實(shí)際工作中,，在定量分析時(shí),，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度，如果在分析波長處含有雜散光,，這時(shí)樣品的透光率較小,，而雜散光大部分透過，使測量吸光度低于真實(shí)吸光度,。

2.儀器噪聲對(duì)測量的影響

儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo),，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號(hào)中的不需要的信號(hào),，掃描100%T和0%T線,，可觀察到分光光度計(jì)的噪聲水平，如果儀器噪聲較大,，會(huì)掩蓋較小的測量信號(hào),，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度,。

3.波長和吸光度準(zhǔn)確度

樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長下測得的,，如果波長誤差很大，測出的值肯定不準(zhǔn),。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對(duì)儀器的直接要求,，更應(yīng)引起足夠的重視。國家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為*士0.6%, B級(jí)土1.0%,。

二,、測量條件的選擇

1.吸光度范圍的選擇

試樣在不同吸光度時(shí)，濃度的相對(duì)誤差不同,，一般選擇A二0.2一0.8之間,，濃度相對(duì)誤差較小，可以通過改變吸收池厚度,、檢測波長或待測溶液濃度,，使吸光度讀數(shù)在適宜范圍內(nèi)。

2.狹縫寬度的選擇

狹縫寬度不僅影響光譜的純度,，也影響吸光度值,，在定量分析時(shí)，為了得到足夠的測量信號(hào),，應(yīng)采用較大狹縫,。在定性分析時(shí)，為了提高分辨率,，應(yīng)采用較小狹縫,，以獲得精細(xì)的光譜結(jié)構(gòu)。

3.吸收池的選擇和使用

吸收池的規(guī)格應(yīng)根據(jù)被測溶液顏色深淺來確定，一般是被測溶液顏色深時(shí)選光程短的,，顏色淺時(shí)選光程長的,，同一實(shí)驗(yàn)使用同一規(guī)格同一套吸收池。在定量測量之前需要對(duì)吸收池作校正和配對(duì)工作,，吸收池不匹配時(shí),，對(duì)測量產(chǎn)生誤差，吸收池方向不同,，透光率亦有差異,，使用時(shí)應(yīng)注意方向。比色皿毛玻璃一面的上端有一個(gè)箭頭,，應(yīng)與光路保持一致,。另外，使用時(shí),，不要把溶液注得太滿,，以防在推動(dòng)比色皿架時(shí)溶液溢出皿外。如透光壁外有溶液存在,，要擦干再測,，否則將產(chǎn)生誤差。

分光光度計(jì)的正確使用和保養(yǎng)也很重要,，我們應(yīng)該做到以下幾點(diǎn):堅(jiān)持標(biāo)準(zhǔn)溶液現(xiàn)用現(xiàn)配,，不使用過期溶液，比色皿應(yīng)保持清潔,、干燥,，禁止用硬物碰擦透明表面；防止儀器振動(dòng),，影響測量穩(wěn)定性;在開機(jī)狀態(tài),，不測量時(shí)，應(yīng)打開樣品池門,，延長光電傳感器壽命,；樣品集中測量，避免開機(jī)次數(shù),，延長光源壽命,；一旦停機(jī)，則應(yīng)待燈冷卻后再重新啟動(dòng),，并預(yù)熱15 min左右再使用,；要經(jīng)常更換儀器的干燥劑，防止光學(xué)元件和光電傳感器受潮生霉,；儀器搬動(dòng)或更換重要部件后,，要重新進(jìn)行性能確認(rèn),，以保證測量結(jié)果的準(zhǔn)確。