兔子白介素9ELISA試劑盒

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（三） 抗體的酶標記方法及標記效果測定 　　1.標記方法 良好的酶結合物取決于兩個條件：即高效價的抗體和高活性的酶,。抗體的活性和純度對制備標記抗體至關重要,，因為特異性免疫反應隨抗體活性和純度的增加而增強,。在酶標記過程中,，抗體的活性有所降低，故需要純度高,、效價高及抗原親和力強的抗體球蛋白,，使用親和層析提純的抗體，可提高敏感性,，而且可稀釋使用,，減少非特異性吸附。 　　酶與抗體交聯,，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法,。郭春祥建立的HRP標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行，標記效果好,，特別適用于實驗室的小批量制備,。其標記程序為：將5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配制的0.06 mol/L的過碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鐘 ,， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,，室溫放置30分鐘后加入含5（g純化抗體的水溶液1ml，混勻并裝透析袋,，以0.05mol/L,、pH9.5的碳酸鹽緩沖液于4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時（或過夜）使之結合，然后吸出,，加硼氫化鈉（NaBH4）溶液（ 5（g/ml）0.2ml,，置4℃冰箱2小時，將上述結合物混合液加入等體積飽和硫酸銨溶液,，置4℃冰箱30分鐘后離心,，將所得沉淀物溶于少許0.02mol/L、pH7.4PBS中,，并對之透析過夜（4℃）,，次日離心除去不溶物，即得到酶標抗體,，用0.02mol/L,、pH7.4PBS稀至5ml，進行測定后,，冷凍干燥或低溫保存,。 　　2.酶標抗體標記效果測定：測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量,、酶與IgG摩爾比值以及結合率,。

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