兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1ELISA試劑盒

7.斑點(diǎn)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）（Dot-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）） 與常規(guī)的微量板ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）比較，Dot-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）具有簡(jiǎn)便,、節(jié)省抗原等優(yōu)點(diǎn),，而且結(jié)果可長(zhǎng)期保存；但其也有不足,，主要是在結(jié)果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序?yàn)椋海?） 載體膜的預(yù)處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,，稍加干燥進(jìn)行壓圈。將陰性,、陽(yáng)性抗原及被檢測(cè)抗原適度稀釋后加入圈中,，置37℃使硝酸纖維素膜*干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點(diǎn)加40－53個(gè)樣品,，每個(gè)壓圈可加抗原液1－20μl,。 　　（2） 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中,，37℃感作15－30分鐘,。封閉液多采用含有正常動(dòng)物血清、pH7.2或pH7.4的PBS,。 　?。?） 加被檢血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈,、置于微量板孔中,，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應(yīng)一定時(shí)間,，用洗滌液洗三次,，每次1－3分鐘,。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。 　?。?） 加酶標(biāo)抗體,，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，用洗滌液洗三次,。 　?。?） 顯色 加入新鮮配制的底物液，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后,，去掉底物液,，加蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。 　?。?） 結(jié)果判定 以陽(yáng)性,、陰險(xiǎn)血清作為對(duì)照，膜片中央出現(xiàn)深棕紅色斑點(diǎn)者為陽(yáng)性反應(yīng),，否則為陰性反應(yīng),。

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