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3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測(cè)試盒測(cè)定意義

GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途徑,、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān),，在機(jī)體糖,、脂,、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。

測(cè)定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸,。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛,、無(wú)機(jī)磷和NAD，340nm處測(cè)定NADH的減少量可反映GADPH活性的高低,。

需自備的儀器和用品

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存,。

試劑二：液體×1瓶,，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色）,，4℃避光保存。臨用前加入667μL無(wú)水乙醇,，蓋緊后充分混勻,，再加入9.333 mL蒸餾水混勻,，避光保存。

試劑四：粉劑×1管,，4℃避光保存,。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解,。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶,，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解,。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,，4℃避光保存。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到570 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管,，加入10μL蒸餾水,，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四,，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）,，置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,，于570nm測(cè)定吸光值,，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管,，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品，100μL試劑二,，100μL試劑三和10μL試劑四,，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min,，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,，于570nm測(cè)定吸光值，記為A標(biāo)準(zhǔn)管,。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完,。

4. 測(cè)定管：取EP管，加入10μL上清液,，100μL試劑二,，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）,，置于沸水浴中保溫15 min,，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,，于570nm測(cè)定吸光值，記為A測(cè)定管,。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完,。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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