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豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）ELISA檢測(cè)試劑盒說明書

最近更新時(shí)間：2024-9-18

提 供 商：上海研生實(shí)業(yè)有限公司資料大?。?/span>12.2KB

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相關(guān)產(chǎn)品：

          豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）ELISA檢測(cè)試劑盒說明書

使用方法：

測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶,。酶是一種有機(jī)催化劑,，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象,。因此該體系常被稱為酶放大體系,。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。|

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

實(shí)驗(yàn)規(guī)則：

1,、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%,?？捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定,。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。

2,、要配備20ul,、50ul、100ul,、1000ul和排槍各一支,。吸取不同的液體后，要更換槍頭,。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),。

3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,，使各種試劑都恢復(fù)到室溫,，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

4,、實(shí)驗(yàn)時(shí),，要使底物避光保存。

5,、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

6,、吸取液體時(shí),，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差,。

7,、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,，液滴會(huì)自然流下去。

8,、液體全部加完后,，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能,。

9、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,。

10、對(duì)結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證,。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,，不同的樣本有不同要求,，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。

4）樣本保存于液氮或干冰,，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析,。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì),、RNA提取、cDNA合成,、qPCR,。

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