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葡萄孢菌PCR檢測試劑盒實驗原理
最近更新時間：2024-8-13
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葡萄孢菌PCR檢測試劑盒說明書
使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑,，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系,。
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
實驗規(guī)則：
1、要保證移液槍的準確性,，誤差不能超過2%,?？捎盟碗娮犹炱竭M行確定,。但有專業(yè)人員進行矯正。
2,、要配備20ul,、50ul,、100ul、1000ul和排槍各一支,。吸取不同的液體后，要更換槍頭,。即使是吸取標準品時,。
3,、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,，使各種試劑都恢復(fù)到室溫,，以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4,、實驗時,，要使底物避光保存,。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確,。
6,、吸取液體時,，要用量程和需要量接近的槍去吸,，減少誤差,。
7,、將液體加到酶標孔中時,，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去,。
8,、液體全部加完后,，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能,。
9,、應(yīng)盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準確性,。
10,、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織,、細胞,、血液、細菌等很多材料,，不同的樣本有不同要求,，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息,、物種,、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4）樣本保存于液氮或干冰,，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析,。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR。