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人Ⅱ型膠原代細(xì)胞C2CELISA檢測(cè)試劑盒洗滌方法
點(diǎn)擊次數(shù):466 發(fā)布時(shí)間:2024-5-8
人Ⅱ型膠原代細(xì)胞C2CELISA檢測(cè)試劑盒洗滌方法:
1. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,,注入與吸出間隔60秒,。洗板5次,。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,,每孔加洗滌液350μl,,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,,在厚的吸水紙上拍干,。洗板5次,。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,;試劑或樣品配制時(shí),,均需充分混勻,并盡量避免起泡,。
1.加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,,注意不要有氣泡,,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時(shí),。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,,甩干,,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,,37℃溫育1小時(shí),。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,,洗板 3次,,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,,甩并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干,。
干4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,,37℃溫育1小時(shí),。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,,洗板5次,,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng),,但不可超過(guò)30分鐘,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止),。
7.每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源,,預(yù)熱儀器,,設(shè)置好檢測(cè)程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束,。