高效液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一,，其應(yīng)用越來越廣泛,。此種儀器在使用過程中，難免會出現(xiàn)各種各樣的問題,，并將直接影響到所測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作,。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預(yù)防和排除這些故障的發(fā)生,，就可正確地使用儀器并最大限度地發(fā)揮儀器的性能,。
1.基線漂移偏大
(1)柱溫波動:控制好柱子和流動相的溫度。
(2)流通池被污染或有氣泡:用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池,。
(3)檢測器出現(xiàn)阻塞,，高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線:取出阻塞物或更換管子,，更換流通池窗需參考檢測器手冊,。
(4)柱平衡慢:特別是流動相發(fā)生變化時，用中等強度的溶劑沖洗,，提前預(yù)約客戶,，在分析前用10～20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。
(5)流動相污染,、變質(zhì)或由低純度溶液配成:使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及高效液相色譜(HPLC)級的溶劑,。
(6)樣品中有強保留的物質(zhì)(高K′值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線:使用保護柱,，如有必要,，在進樣之間或在分析過程中，用強溶劑沖洗柱子,。
(7)流動相不均勻,、配比不當(dāng)或流速有變化:在配制流動相時應(yīng)充分搖勻，同時要根據(jù)目標(biāo)分離物和流動相的極性合理配比,，并保持流速恒定,。
(8)柱子平衡時間短:HPLC色譜柱根據(jù)使用環(huán)境不同，平衡時間通常要控制在(30～60)min,。
(9)檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處:檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處不僅影響檢測器的靈敏度和結(jié)果的準(zhǔn)確度,，還會使基線漂移加大，應(yīng)該將檢測器設(shè)定在最大吸收波長處,。
2.噪聲偏大
(1)在流動相、檢測器或泵中有空氣:流動相脫氣,，并沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣,。
(2)管路漏液:檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液,，是否有鹽析出和不正常的噪音,。
(3)流動相污染,、變質(zhì)或有低純度溶液配制:使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。
(4)溫度差異影響(柱溫過高,，檢測器未加熱):減少差異或加上熱交換器,。
(5)在同一條線上有其他電子設(shè)備:斷開LC、檢測器和記錄儀,，檢查干擾是否來自于外部,，加以更正。
(6)檢測器/ 記錄儀電子元件的問題:斷開檢測器和記錄儀的電源,，檢查并更正,。
(7)泵震動:在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
(8)檢測器燈能量不足:更換燈,。
(9)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱,。
3.重復(fù)性偏大
(1)峰型不佳(如峰拖尾、峰寬較大,、分裂峰等都不利于峰面積的計算,，造成重復(fù)性偏大):可以改變色譜柱條件，改變溫度,、流速等參數(shù),，以獲得較尖銳的峰型，利于保證積分的準(zhǔn)確性,。
(2)泵流速不穩(wěn):可以根據(jù)泵流速檢定情況作出判斷,，泵流速的穩(wěn)定性對峰面積的重復(fù)性影響非常大。例如:在其他條件不變的情況下,，將流速由1.0mL/min改為0.5mL/min,，結(jié)果保留時間加倍，峰面積也加倍,，也可以看出峰面積在一定條件下基本與流速成反比,。
(3)色譜柱影響:色譜柱固定相的流失，以及色譜柱對標(biāo)樣的吸收等都會影響檢測結(jié)果,；特殊情況下還會發(fā)生柱子對樣品的不可逆吸收,，建議使用替代柱。
(4)柱溫有變化:柱溫對保留時間有顯著影響,，保留時間的變化直接影響積分面積的大小,。因此應(yīng)保持柱溫恒定。
(5)進樣器漏液:進樣器漏液導(dǎo)致進入色譜柱的樣品量發(fā)生變化,，進而導(dǎo)致峰面積發(fā)生變化,，應(yīng)檢查進樣墊等易損部件以排除漏液。
(6)樣品本身的影響:樣品降解或溶劑揮發(fā)都會導(dǎo)致重復(fù)性偏大,，應(yīng)確定方法的準(zhǔn)確性和采取措施控制揮發(fā),。
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