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無血清培養(yǎng)很難,?選對微孔板可以幫大忙

閱讀:285      發(fā)布時(shí)間:2024-8-23
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轉(zhuǎn)染,,是真核細(xì)胞主動(dòng)或被動(dòng)導(dǎo)入外源基因片段的過程,研發(fā)人員通過該技術(shù)研究基因,、觀測蛋白表達(dá),,亦可以特異性增強(qiáng)/抑制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的基因表達(dá)。

 

細(xì)胞轉(zhuǎn)染分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的外源基因不整合入細(xì)胞基因組,,因此表達(dá)時(shí)間有限,不能傳給子代細(xì)胞,;穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是通過病毒載體等方法將外源性DNA/基因?qū)爰?xì)胞,,并整合至細(xì)胞基因組,參與細(xì)胞基因組復(fù)制,,可經(jīng)過篩選得到長期穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株,。

 

正常培養(yǎng)基中的血清含有核酸酶,,會(huì)降解外源DNA,此外,,血清中其它不確定成分或蛋白因子易與核酸形成復(fù)合物,,影響轉(zhuǎn)染效率。因此,,使用無血清或低血清的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),,并在轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成的過程中嚴(yán)格限制血清的使用,可以保證轉(zhuǎn)染的有效性,。

 

在無血清環(huán)境中,,細(xì)胞的活力、貼壁能力和增殖能力下降,,為了減少無血清環(huán)境給細(xì)胞造成的負(fù)面影響,,BRAND研發(fā)出經(jīng)特殊修飾的細(xì)胞培養(yǎng)板表面,cellGradeTM premium表面支持細(xì)胞貼壁,,并提高轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖量,。


不同表面處理的細(xì)胞培養(yǎng)板

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不同的細(xì)胞培養(yǎng)板對比試驗(yàn)

 

狀態(tài)良好的HEK293.EBNA細(xì)胞以相同數(shù)量種板至BRAND cellGradeTM premium的黑色、底部透明的96孔培養(yǎng)板中,,和另外2個(gè)廠家同類型的培養(yǎng)板做對比,。細(xì)胞種板培養(yǎng)24小時(shí)后,用每孔200 ng的GFP編碼質(zhì)粒-DNA pEGFP-C1轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,轉(zhuǎn)染試劑為40 kDa聚乙烯亞胺(PEI 40),,DNA:PEI=1:3,72小時(shí)后,,使用電動(dòng)移液器以相等低速移取并棄去培養(yǎng)基,,并用200 μL PBS洗板2次,檢測ex485/em535 nm處的剩余相對熒光單位(RFU),。

本實(shí)驗(yàn)控制了細(xì)胞品質(zhì),、培養(yǎng)條件、接種量,、轉(zhuǎn)染條件,、檢測條件等的一致性,唯一的變量是采用不同廠家表面處理的細(xì)胞培養(yǎng)板,,結(jié)果如圖2所示,,從中可以看出,BRAND cellGradeTM premium表面處理的細(xì)胞培養(yǎng)板對轉(zhuǎn)染GFP表達(dá)細(xì)胞的生長,、貼附和增殖有良好的促進(jìn)效果,。


圖片

轉(zhuǎn)染細(xì)胞HEK293.EBNA GFP相對熒光單位結(jié)果

 

選對微孔板,讓你的實(shí)驗(yàn)更簡單,!

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