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無血清培養(yǎng)很難？選對微孔板可以幫大忙

閱讀：242 發(fā)布時間：2024-8-23

轉(zhuǎn)染,，是真核細胞主動或被動導入外源基因片段的過程,，研發(fā)人員通過該技術(shù)研究基因、觀測蛋白表達,，亦可以特異性增強/抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達,。

細胞轉(zhuǎn)染分為瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時轉(zhuǎn)染的外源基因不整合入細胞基因組,，因此表達時間有限,，不能傳給子代細胞；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是通過病毒載體等方法將外源性DNA/基因?qū)爰毎?，并整合至細胞基因組,，參與細胞基因組復制，可經(jīng)過篩選得到長期穩(wěn)定表達的細胞株,。

正常培養(yǎng)基中的血清含有核酸酶,，會降解外源DNA，此外,，血清中其它不確定成分或蛋白因子易與核酸形成復合物,，影響轉(zhuǎn)染效率。因此,，使用無血清或低血清的培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng),，并在轉(zhuǎn)染復合體形成的過程中嚴格限制血清的使用，可以保證轉(zhuǎn)染的有效性,。

在無血清環(huán)境中,，細胞的活力、貼壁能力和增殖能力下降,，為了減少無血清環(huán)境給細胞造成的負面影響,，BRAND研發(fā)出經(jīng)特殊修飾的細胞培養(yǎng)板表面，cellGrade^TM premium表面支持細胞貼壁,，并提高轉(zhuǎn)染后的細胞增殖量,。

不同表面處理的細胞培養(yǎng)板

不同的細胞培養(yǎng)板對比試驗

狀態(tài)良好的HEK293.EBNA細胞以相同數(shù)量種板至BRAND cellGrade^TMpremium的黑色、底部透明的96孔培養(yǎng)板中,，和另外2個廠家同類型的培養(yǎng)板做對比,。細胞種板培養(yǎng)24小時后，用每孔200 ng的GFP編碼質(zhì)粒-DNA pEGFP-C1轉(zhuǎn)染細胞,，轉(zhuǎn)染試劑為40 kDa聚乙烯亞胺（PEI 40）,，DNA:PEI=1:3,，72小時后，使用電動移液器以相等低速移取并棄去培養(yǎng)基,，并用200 μL PBS洗板2次,，檢測ex485/em535 nm處的剩余相對熒光單位（RFU）。

本實驗控制了細胞品質(zhì),、培養(yǎng)條件,、接種量、轉(zhuǎn)染條件,、檢測條件等的一致性,，唯一的變量是采用不同廠家表面處理的細胞培養(yǎng)板，結(jié)果如圖2所示,，從中可以看出,，BRAND cellGrade^TMpremium表面處理的細胞培養(yǎng)板對轉(zhuǎn)染GFP表達細胞的生長、貼附和增殖有良好的促進效果,。

轉(zhuǎn)染細胞HEK293.EBNA 的GFP相對熒光單位結(jié)果

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