從電子躍遷的角度來講，熒光是指某些物質(zhì)吸收了與它本身特征頻率相同的光線以后,，原子中的某些電子從基態(tài)中的zui低振動(dòng)能級(jí)躍遷到較高的某些振動(dòng)能級(jí),。電子在同類分子或其他分子中撞擊，消耗了相當(dāng)?shù)哪芰?，從而下降到電子激發(fā)態(tài)中的zui低振動(dòng)能級(jí),，能量的這種轉(zhuǎn)移形式稱為NO輻射躍遷。由zui低振動(dòng)能級(jí)下降到基態(tài)中的某些不同能級(jí),，同時(shí)發(fā)出比原來吸收的頻率低,、波長(zhǎng)長(zhǎng)的一種光，就是熒光,。被化合物吸收的光稱為激發(fā)光，產(chǎn)生的熒光稱為發(fā)射光,。熒光的波長(zhǎng)總要長(zhǎng)于分子吸收的紫外光波長(zhǎng),，通常在可見光范圍內(nèi)。熒光的性質(zhì)與分子結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系,，不同結(jié)構(gòu)的分子被激發(fā)后,，并不是都能發(fā)射熒光。
在光致發(fā)光中,，發(fā)射出的輻射總依賴于所吸收的輻射量,。由于一個(gè)受激發(fā)的分子回到基態(tài)時(shí)可能以NO輻射躍遷的形式產(chǎn)生能量損失，因而發(fā)射輻射的光子數(shù)通常都少于吸收輻射的光子數(shù),，它以量子效率Q來表示,。
在固定的實(shí)驗(yàn)條件下，量子效率是個(gè)常數(shù),，通常Q小于1,。對(duì)可用熒光檢測(cè)的物質(zhì)來說，Q值一般在0.1～0.9之間,。熒光強(qiáng)度F與吸收光強(qiáng)度成正比.對(duì)于稀溶液,，熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)溶液濃度,、摩爾吸光系數(shù)、吸收池厚度,、入射光強(qiáng)度,、熒光的量子效率及熒光的收集效率等成正相關(guān)。在其他因素保持不變的條件下,，物質(zhì)的熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)溶液濃度成正比,這是熒光檢測(cè)器的定量基礎(chǔ),。熒光檢測(cè)器屬于溶質(zhì)型檢測(cè)器，可直接用于定量分析,。
熒光涉及光的吸收和發(fā)射兩個(gè)過程,，因此任何熒光化合物，都有兩種特征的光譜：激發(fā)光譜(exitation spectrum)和發(fā)射光譜(emission spectrum),。
熒光屬于光致發(fā)光,，需選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)以利于檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定,。激發(fā)光譜的具體檢測(cè)辦法是通過掃描激發(fā)單色器,，使不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長(zhǎng)的發(fā)射單色器,，由光檢測(cè)元件檢測(cè),。zui終得到熒光強(qiáng)度對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的zui大波長(zhǎng)處,，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目zui多,，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強(qiáng)的熒光,。當(dāng)考慮靈敏度時(shí),，測(cè)定應(yīng)選擇zui大激發(fā)波長(zhǎng)。
一般所說的熒光光譜,，實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜,。它是在激發(fā)單色器波長(zhǎng)固定時(shí)，發(fā)射單色器進(jìn)行波長(zhǎng)掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(zhǎng)(即發(fā)射波長(zhǎng),，Em)變化的曲線,。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測(cè)定時(shí)選擇合適的測(cè)定波長(zhǎng)的依據(jù),。
另外,，由于熒光測(cè)量?jī)x器的特性，使光源的能量分布,、單色器的透射率和檢測(cè)器的響應(yīng)等性能會(huì)隨波長(zhǎng)而變,，所以同一化合物在不同的儀器上會(huì)得到不同的光譜圖，且彼此間無(wú)類比性,，這種光譜稱為表觀光譜,。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜,，則需要對(duì)儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜,。
激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)是熒光檢測(cè)的必要參數(shù),。選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，對(duì)檢測(cè)的靈敏度和選擇性都很重要,，尤其是可以較大程度地提高檢測(cè)靈敏度,。
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