液相色譜儀是分析工作者常用的“一門技術(shù)”。本人工作15.5年,，深感何時(shí)能將液相做到有“打游戲”感覺時(shí),，便是到了游刃有余、駕輕就熟的境界?，F(xiàn)今的液相軟件均已具備了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能,，如能庖丁解牛般使用,，便可將此測定做到事半功倍、輕松自如,。
一,、 水相中的溶質(zhì)溶解方式
水相中需溶解的無機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì),，建議采用加熱法,，不建議采用振搖、超聲等方式,。因此種方式的溶解,，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團(tuán)濃度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有機(jī)溶劑,、溫度劇降等）,，極易析出少量結(jié)晶；而一旦析出,，便將損傷儀器和色譜柱,，呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白粉”的現(xiàn)象。
二,、 流動(dòng)相的配制與使用
1. 恒度洗脫
一定是將水相與有機(jī)相混合后,、抽濾（使用混合型過濾膜），用一個(gè)管路（如A管）泵入儀器,，這是使用的原則,。切勿因節(jié)約有機(jī)相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個(gè)管路（一個(gè)純水相,、一個(gè)純有機(jī)相）泵入儀器,，即便配制了脫氣機(jī)。因此種情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出,。
剩余流動(dòng)相*可繼續(xù)使用,，密封后放置陰涼處；待下次試驗(yàn)時(shí)與新配制的流動(dòng)相混合后抽濾即可,。無需擔(dān)心發(fā)霉,、無機(jī)鹽析出、揮發(fā),、比例不準(zhǔn)等問題,，這些皆為疑神疑鬼的表現(xiàn)。實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的標(biāo)準(zhǔn),！實(shí)踐吧~
2. 梯度洗脫
流動(dòng)相配制最為科學(xué)的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相,、B相為低比例的水相-高比例的有機(jī)相（英國藥典幾乎均如此）；其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相,、B相為純有機(jī)相,；最不科學(xué)的為：A相為純水相,、B相為純有機(jī)相，如既有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用了此種方式,，建議改為第二種或第一種方式,，否則基線漂移嚴(yán)重，難以進(jìn)行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測,。
梯度洗脫結(jié)束后,，建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開始下一針測定,。這10分鐘的穩(wěn)定極為關(guān)鍵,。切勿短時(shí)間內(nèi)回到初始狀態(tài)，會(huì)對(duì)儀器和色譜柱損傷較大,。
三,、 色譜柱的安裝
標(biāo)準(zhǔn)SOP應(yīng)為：
取A管路放入流動(dòng)相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出,，持續(xù)10秒→擰緊泵頭→流動(dòng)相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出,，觀測是否呈拋物線狀，持續(xù)5秒→流速逐步降至1.0ml/min →安裝色譜柱,，待20秒后,，流動(dòng)相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端→手握兩端螺絲帽，擰緊,。
以上安裝順序遵循的是：
逐級(jí)排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液,，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗(yàn)梯度洗脫連續(xù)一周,，第一針與最后一針主成分保留時(shí)間相差在6秒以內(nèi),。
四、 試驗(yàn)后色譜柱的清洗
1.最為常用的C8柱,、C18柱
1.1 流動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)
繼續(xù)沖洗30分鐘,，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗(yàn)時(shí)溫度,，即可,。
1.2 水相中有無機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺,、高氯酸等物質(zhì)時(shí)
先采用純水（或含有2%甲醇）,，沖洗A管路（試驗(yàn)采用哪個(gè)管路，就要從頭到尾沖洗該管路）,，時(shí)間30分鐘（如流動(dòng)相中有表面活性劑,，適當(dāng)增加時(shí)間），流速1.0ml/min，柱溫可較試驗(yàn)溫度高出5~10℃,；隨后更換成20%甲醇再?zèng)_洗30分鐘,，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉,。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處,。
很多同仁其后采用高比例的甲醇沖洗，實(shí)屬畫蛇添足,，導(dǎo)致殘余的有機(jī)相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑,，從而在泵頭上、色譜柱中析出,，也導(dǎo)致了色譜柱壽命大為縮短,。本人曾使用過一根約2000元的色譜柱,，正著用了四年,、倒著用了兩年（倒著用測非有關(guān)物質(zhì)）。
2. 其他類型色譜柱
查詢獲取如何科學(xué)合理地使用與清洗保存該類型色譜柱的方法,，切勿盲動(dòng),，否則導(dǎo)致色譜柱性能急劇下降。
五,、 試驗(yàn)順序
工作流程應(yīng)如下進(jìn)行：
(1) 0~2小時(shí) 配制流動(dòng)相,、對(duì)照品和供試品溶液等，切勿催促昨日試驗(yàn)同事,。
(2) 2~3小時(shí) 采用A管路注入流動(dòng)相（B,、C、D管路一般不用,，除非梯度洗脫才用到B管路）,，平衡1小時(shí)。如流動(dòng)相中有表面活性劑,，建議前一晚小流速過夜,，第二天上班后將流速增至1.0ml/min，平衡1小時(shí)后即可開始做試驗(yàn),。
(3) 3~5小時(shí) 測定空白溶劑,，一定要做到基線不漂移后方可開始測定。所謂“不漂移”,，通常系指以1.0%自身對(duì)照溶液主成分峰高約20%高度來設(shè)定的視野范圍觀察所得,，切不可設(shè)定得過小，使得雜質(zhì)峰顯得很突兀,、基線抖動(dòng)得很厲害,，弄得人很擔(dān)心。
(4) 5~8小時(shí) 配制完所有樣品,，預(yù)試了對(duì)照溶液和供試品溶液,，設(shè)定好自動(dòng)進(jìn)樣程序,，程序最后一針設(shè)定為小流速過夜，紫外燈關(guān)閉,。切勿設(shè)定為切換至B管路洗脫,，此舉得不償失。
(5) 9~24小時(shí) 放心回家,，讓儀器自動(dòng)進(jìn)樣,，除非不穩(wěn)定的樣品（配制一份測定一針）。充分利用下班后的16小時(shí),，做到從容不迫,、鎮(zhèn)定自若。如單位還無自動(dòng)進(jìn)樣裝置,，建議向領(lǐng)導(dǎo)申請購買,，因一臺(tái)自動(dòng)媲美三臺(tái)手動(dòng)。
(6) 第二天0~0.5小時(shí) 檢查并計(jì)算昨晚試驗(yàn)結(jié)果,，如發(fā)現(xiàn)不良記錄,，將流速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后,，測定重新配制的該份樣品即可（同時(shí)回校對(duì)照一針）,。無需全部重新測定，不要過度謹(jǐn)小慎微,。
(7) 第二天0.5~2.0小時(shí) 如上沖洗色譜柱,，交給其后試驗(yàn)同事。
六,、 液相軟件的使用
現(xiàn)今幾大主流品牌的硬件性能已相差無幾,，主要還是軟件的設(shè)計(jì)是否能使操作者得心應(yīng)手、隨心所欲,。
建議掌握各軟件的批處理,、編輯樣品處理模板等功能，做到一勞永逸,，讓軟件充分為工作所用,。“磨刀不誤砍柴工”：本人曾用20分鐘完成500個(gè)溶出度樣品數(shù)據(jù)處理，做出溶出曲線圖,。體會(huì)一下~
七,、 其他
1.如需使用正相系統(tǒng)，一定要單獨(dú)采用一臺(tái)儀器（如二手的,、較為破舊的,、淘汰的等），切勿采用異丙醇轉(zhuǎn)換，此舉對(duì)儀器損傷極大,。
2. 正相所使用的流動(dòng)相（如正己烷,、環(huán)己烷等），無需抽濾,，混勻超聲后即可使用,，“大道至簡”。
3. 柱溫箱必須配制,。如欲經(jīng)濟(jì),，可購買國產(chǎn)柱溫箱
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