1.流動(dòng)相溶劑應(yīng)選擇HPLC的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑。流動(dòng)相使用前用0.45μm濾膜過濾,、脫氣,，清除微粒和灰塵。在送液泵內(nèi),，為了防止雜物（固體）進(jìn)入流路,，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm,，比此更小的顆粒仍然可通過,，這會(huì)導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此,，建議常用0.45μm濾膜過濾,。流動(dòng)相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣,，在溶劑混合時(shí),，或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡，會(huì)導(dǎo)致泵誤動(dòng)作和輸液不暢,，檢測器產(chǎn)生噪聲信號(hào)等,。
2.流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后使用。流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí),，流動(dòng)相在恢復(fù)到室溫前,，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移,，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象,。水與有機(jī)溶劑混合時(shí)，混合液變化大,，往往會(huì)與室溫相差很大,，務(wù)必注意。
3.做HPLC流動(dòng)相的試劑應(yīng)用HPLC級(jí)的,、水應(yīng)用二次蒸餾水,，水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換，防止長菌變質(zhì),。使用去離子水,、針劑水、純凈水（炊用）并不合適,、尤其是做梯度洗脫時(shí),，水中的不純物會(huì)成為鬼峰,，從而干擾分析結(jié)果,。
4.流動(dòng)相的pH值過高或過低,，流動(dòng)相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,，使用離子對(duì)試劑等,，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對(duì)色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的
5.用緩沖鹽做流動(dòng)相時(shí),，在使用前和使用后都要用水清洗流路,，絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過夜或更長時(shí)間。
6.若需要使用含鹽的流動(dòng)相,，使用前請(qǐng)過濾,。并且使用該含鹽流動(dòng)相前，色譜柱需先用低比例有機(jī)相（有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗,，以免緩沖鹽析出,。流動(dòng)相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，以免流動(dòng)相因滋生微生物而造成柱填料的污染,。
7.進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意梯度變化過程中流動(dòng)相的互溶性，避免因流動(dòng)相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問題,。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時(shí),，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲(chǔ)存流動(dòng)相后在接柱子。
8.在更換兩種互不相溶的流動(dòng)相時(shí),，中間要用異丙醇溶液清洗過渡,。例如：先用甲醇水做流動(dòng)相，然后在用正己烷做流動(dòng)相時(shí),，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水,，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣,。在更換流動(dòng)相時(shí)還要考慮色譜柱是否更換,。
9.儀器在短期（兩三天）不用時(shí)，流路中可以是甲醇或水,。儀器在長期不用時(shí),，流路中應(yīng)用甲醇。
10.對(duì)于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時(shí),，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動(dòng)相溶劑,，如甲醇、乙腈等,。
11.當(dāng)流動(dòng)相溶劑為乙腈時(shí),，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間,，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常,。這是由于乙氰的粘性大,，導(dǎo)致泵的流速降低?？蛇m當(dāng)提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可,。
12.流動(dòng)相含有濃硫酸、濃硝酸,、二氯,，乙酸、二氯甲烷,、氯仿,、丙酮、四氯呋南,、二甲化砜等溶劑,，會(huì)對(duì)流路中的PEEK樹脂管路強(qiáng)度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺,。流動(dòng)相含有鹵素離子的溶劑,，如KCI、NaCI,、NH4CI等,。對(duì)流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用,。非用不可時(shí),，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈,。
13.用于檢定梯度等性能時(shí),，短時(shí)間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。
14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合,，否則有可能會(huì)引起爆炸,。
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