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核心提示：HPLC系統(tǒng)內(nèi)部可能的污染物來自人的觸摸,，暴露在實驗室化學(xué)環(huán)境,，與零部件制造相關(guān)的殘留物，或來自先前的流動相和樣品的殘余物,。

HPLC系統(tǒng)內(nèi)部可能的污染物來自人的觸摸,，暴露在實驗室化學(xué)環(huán)境，與零部件制造相關(guān)的殘留物,，或來自先前的流動相和樣品的殘余物,。雖然HPLC系統(tǒng)自身也會逐步地被流動相清洗,，但某些釋放出的雜質(zhì)會吸附在色譜柱上以及檢測器潤濕的表面上,，因而會降低總的性能。

•磷酸清洗：通常用于從系統(tǒng)中除去有機雜質(zhì),?？赡苁怯捎谙礈熳饔茫坪醣葟娪袡C溶劑更好也更快,。這一步清洗必須在硝酸鈍化之前完成,。

•硝酸鈍化：實際上是作用于不銹鋼表面，在表面上生成均勻的氧化層,。這層氧化膜保護不銹鋼免受腐蝕(鹵化物,，螯合劑，等等)并且盡量減少浸出的金屬離子進(jìn)入流動相,。

以下應(yīng)用需要在使用前做磷酸清洗和硝酸鈍化,，包括：

•所有的氨基酸分析系統(tǒng)；

•所有包含電化學(xué)檢測器的系統(tǒng),；

•所有要分析無機陽離子,，包括過渡金屬的系統(tǒng)；

•所有利用柱后添加衍生試劑或絡(luò)合樣品組分的系統(tǒng),。

以下應(yīng)用需要在使用前只做磷酸清洗,，包括：

•所有常規(guī)用途的,、可能在低pH環(huán)境下在低紫外檢測波長下運行的HPLC系統(tǒng)；

•所有需要高靈敏度性能的梯度紫外檢測系統(tǒng),。

一.準(zhǔn)備工作

首先,，摘下色譜柱，用兩通或接頭取代色譜柱,。在實行這一清洗步驟時,，如果有可能選擇監(jiān)測的紫外波長為：254nm。通過軟件或移去電纜的方式取消紫外檢測器的自動回零功能,。

二.具體步驟

1,、用甲醇*沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過泵的所有管路,。

2,、用水*沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過泵的所有管路,。

3,、以等比例方式通過泵的所有管路導(dǎo)入～30%v/v磷酸水溶液。以1mL/min流速洗大約一個小時,。在沖洗期間活動所有的閥,，包括：參比閥、進(jìn)樣閥及旁路閥等等,。

4.用水*沖洗所有管路和系統(tǒng),。

必要時用6N硝酸(HN03)重復(fù)以上步驟。否則,，跳到第7步,。注意：硝酸是一個強紫外吸收溶液。除非絕對需要,，不要做鈍化程序,。

5.以等比例方式通過泵的所有管路導(dǎo)人6N硝酸水溶液(大約是40%)。以1mL/min流速洗大約一個小時,。

6.用水*沖洗系統(tǒng),，仔細(xì)檢查是否有任何滲漏，在沖洗期間反復(fù)活動所有的閥,，包括：參比閥,、進(jìn)樣閥及旁路閥等等。

注意：如果你要用低于270nm的紫外波長作檢測,，則需要更大量水的清洗過程,，不斷的換新鮮水并活動各個閥(沖洗進(jìn)樣器，等)以便從系統(tǒng)中除去所有的痕量硝酸根離子。硝酸清洗后經(jīng)常在幾天之內(nèi)都會觀察到在低紫外波長下有負(fù)的基線漂移,。勤換水和有耐心是盡快消除紫外本底的關(guān)鍵,。

7.返回到甲醇洗，然后繼續(xù)用實驗所需的溶劑沖洗,。

8.通過軟件或接上電纜的方式重新使紫外檢測器的自動回零功能恢復(fù),。