檢測(cè)器的作用是將色譜柱流岀物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)。液相色譜檢測(cè)器共有6種,，檢測(cè)不同的物質(zhì)選擇不同的檢測(cè)器,，今天，小析姐就和小伙伴一起看看各種檢測(cè)的原理及選擇方法,。
檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào),，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光,、示差折光,、化學(xué)發(fā)光等。
檢測(cè)器分類
A.選擇性檢測(cè)器：組分性質(zhì)
1,、紫外可見吸收檢測(cè)器(UVD)
2,、熒光檢測(cè)器(FD)
B.通用型檢測(cè)器：總體性質(zhì)
3、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)
4,、電化學(xué)檢測(cè)器(ED)
5,、示差折光檢測(cè)器(RID)
01.紫外可見吸收檢測(cè)器
紫外可見吸收檢測(cè)器(ultraviolet-visibledetector，UVD)是HPLC中應(yīng)用*泛的檢測(cè)器之一,，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器,。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬,，噪聲低,，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng,，檢測(cè)后不破壞樣品,，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用,。紫外可見檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似,，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見光度計(jì)。
(1)紫外吸收檢測(cè)器
紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源,，氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng),，并安裝一個(gè)光柵型單色器，其波長(zhǎng)選擇范圍寬(190nm～800nm),。它有兩個(gè)流通池,，一個(gè)作參比，一個(gè)作測(cè)量用,，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上,，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無吸收,，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等,，無信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí),，吸收一定的紫外光,，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號(hào)輸出,，輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān),。
局限：流動(dòng)相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動(dòng)相,，每種溶劑都有截止波長(zhǎng),，當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下,，因此,，紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)。
(2)光電二極管陣列檢測(cè)器(photodiodearraydetector,，PDAD)
也稱快速掃描紫外可見分光檢測(cè)器,，是一種新型的光吸收式檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件,，構(gòu)成多通道并行工作,，同時(shí)檢測(cè)由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長(zhǎng)的光信號(hào),，然后對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),，得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù),，從而迅速?zèng)Q定具有*性和靈敏度的波長(zhǎng),。
單光束二極管陣列檢測(cè)器，光源發(fā)出的光先通過檢測(cè)池,，透射光由全息光柵色散成多色光,，射到陣列元件上，使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè),。陣列式接收器上的光信號(hào)用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來,，每幅圖象僅需要10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度,，因此可隨峰掃描,。
02.熒光檢測(cè)器
熒光檢測(cè)器(fluorescencedetector，F(xiàn)D)是一種高靈敏度,、有選擇性的檢測(cè)器,，可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物,，再進(jìn)行熒光檢測(cè),。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng/ml,，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí),，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬,。
近年來，采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比,，因而具有很高的靈敏度,，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。
03.示差折光檢測(cè)器
示差折光檢測(cè)器(differentialrefractiveIndexdetector,，RID)是一種濃度型通用檢測(cè)器,，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分,，如高分子化合物,、糖類、脂肪烷烴等,，可用示差檢測(cè)器檢測(cè),。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測(cè)定樣品含量的。
光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí),，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射,。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè),，二者相差愈大,，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比,。
04
電化學(xué)檢測(cè)器
電化學(xué)檢測(cè)器(electrochemicaldetector,，ED)主要有安培、極譜,、庫(kù)侖,、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器,，屬選擇性檢測(cè)器,，可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無機(jī)和有機(jī)陰陽(yáng)離子,、生物組織和體液的代謝物,、食品添加劑、環(huán)境污染物,、生化制品,、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中,，電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用最多,。
電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是：
?、凫`敏度高，最小檢測(cè)量～般為ng級(jí),，有目可達(dá)pg級(jí),；
②選擇性好,，可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)；
?、劬€性范圍寬,，一般為4～5個(gè)數(shù)量級(jí)；
?、茉O(shè)備簡(jiǎn)單,，成本較低；
?、菀子谧詣?dòng)操作,。
05.化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(Chemiluminescencedetector，CD)是近年來發(fā)展起來的一種快速,、靈敏的新型檢測(cè)器,，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉,、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn),。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物,，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí),，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng),，故叫作化學(xué)發(fā)光,。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合,，引起化學(xué)反應(yīng),，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比,。
這種檢測(cè)器不需要光源,，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵,，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中,，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào),，就可進(jìn)行檢測(cè),。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g,。
06.蒸發(fā)光散射檢測(cè)器
蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(EvaporativeLight-scatteringDetector,ELSD)，能檢測(cè)不含發(fā)色團(tuán)的化合物,，如：碳水化合物,、脂類、聚合物,、未衍生脂肪酸和氨基酸,、表面活性劑、藥物(人參皂苷,、黃芪甲苷),，并在沒有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測(cè)未知化合物。
蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的*檢測(cè)原理為,，首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠,，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測(cè)池中得到檢測(cè),。
1,、霧化：
液體流動(dòng)相在載氣壓力的作用下在霧化室內(nèi)轉(zhuǎn)變成細(xì)小的液滴，從而使溶劑更易于蒸發(fā),。液滴的大小和均勻性是保證檢測(cè)器的靈敏度和重復(fù)性的重要因素,。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，通過對(duì)氣壓和溫度的精確控制,，確保在霧化室內(nèi)形成一個(gè)較窄的液滴尺寸分布,，使液滴蒸發(fā)所需要的溫度大大降低。
2,、蒸發(fā)：
載氣把液滴從霧化室運(yùn)送到漂移管進(jìn)行蒸發(fā),。在漂移管中，溶劑被除去,，留下微?；蚣?nèi)苜|(zhì)的小滴。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器采用低溫蒸發(fā)模式,，維持了顆粒的均勻性,，對(duì)半揮發(fā)性物質(zhì)和熱敏性化合物同樣具有較好的靈敏度。
3,、檢測(cè)：
光源采用激光,，溶質(zhì)顆粒從漂移管出來后進(jìn)入光檢測(cè)池，并穿過激光光束,。被溶質(zhì)顆粒散射的光通過光電倍增管進(jìn)行收集,。溶質(zhì)顆粒在進(jìn)入光檢測(cè)池時(shí)被輔助載氣所包封，避免溶質(zhì)在檢測(cè)池內(nèi)的分散和沉淀在壁上，極大增強(qiáng)了檢測(cè)靈敏度并極大地降低了檢測(cè)池表面的污染,。
不同于紫外和熒光檢測(cè)器,，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測(cè),，不受其官能團(tuán)的影響,。敏度比示差折光檢測(cè)器高，對(duì)溫度變化不敏感,，基線穩(wěn)定,，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。
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