一,、無(wú)菌操作要求:

1. 接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽,。
     
2. 進(jìn)行接種食品樣品時(shí),，必須穿的工作服、帽及拖鞋,，應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間,， 工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。  
   
3. 接種食品樣品時(shí),，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手,，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?br />     
4. 進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌,，打開(kāi)包裝未使用完的器皿,，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用,。       

5. 從包裝中取出吸管時(shí),，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí),，吸管尖不得觸及試管或平皿邊,。
      
6. 接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作,，接種細(xì)菌或樣品時(shí),，吸管從包裝中取 出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒。 
    
7. 接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲,，必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處,，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min,，再經(jīng)火焰燒灼,。

8. 吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取,，不得直接用口吸,。
 

二,、無(wú)菌間使用要求

1、無(wú)菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃,，并要密封,，不得隨意打開(kāi)，并設(shè)有與無(wú)菌間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門(mén),，另設(shè)有0.5-0.7平方米的小窗,，以備進(jìn)入無(wú)菌間后傳遞物品。

2,、無(wú)菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔,，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺(tái)面,，不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品,。
      
3、無(wú)菌間使用前后應(yīng)將門(mén)關(guān)緊,， 打開(kāi)紫外燈,，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈,，距離在1.0m處,，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈,，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作,，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭,，除去上面灰塵和油垢,，以減少紫外線穿透的影響。 
    
4,、處理和接種食品標(biāo)本時(shí),，進(jìn)入無(wú)菌間操作，不得隨意出入,，如需要傳遞物品,，可通過(guò)小窗傳遞。      

5,、在無(wú)菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí),，則應(yīng)有過(guò)濾裝置。

三,、消毒滅菌要求

微生物檢測(cè)用的玻璃器皿,、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等,，必須經(jīng)滅菌后方能使用,。

（一）干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法

1,、滅菌前準(zhǔn)備
（1）所有需要滅菌的物品先應(yīng)清洗晾干，玻璃器皿如吸管,、平皿用紙包裝嚴(yán)密,，如 用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開(kāi)。
（2）裝培養(yǎng)基的三角瓶塞,，用紙包好,，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出,，用紗布包 好,。

2、裝放
（1）干熱滅菌器：裝放物品不可過(guò)擠,，且不能接觸箱的四壁,。
（2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi),，物品之間不能過(guò)擠,。

3、設(shè)備檢查
（1）檢查門(mén)的開(kāi)關(guān)是否靈活,，橡皮圈有無(wú)損壞,，是否平整。
（2）檢查壓力表蒸氣排盡時(shí)是否停留在零位,，關(guān)好門(mén)和蓋,，通蒸氣或加熱后，觀察是手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進(jìn)行：
①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水,，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時(shí)應(yīng)將水 量補(bǔ)足,，水變混濁需更換）；
②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中（無(wú)軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用）,；
③蓋好頂蓋擰緊,，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱,，立式壓力鍋通上電源,，并打開(kāi)頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰后排氣10-15min）；
④關(guān)閉排氣閥,，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求,，并維持規(guī)定時(shí)間（按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定）；
⑤達(dá)到規(guī)定時(shí)間后,，對(duì)需干燥的物品,，立即打開(kāi)排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時(shí)，自然冷卻至 60℃后開(kāi)蓋取物,，如為液體物品，不要打開(kāi)排氣閥,，而應(yīng)立即將鍋去除熱源,，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零,，溫度降到60℃以下再開(kāi)蓋取物,，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。   
（3）臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進(jìn)行：
①關(guān)緊鍋門(mén),，打開(kāi)進(jìn)氣閥,，將蒸氣引入夾層進(jìn)行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動(dòng)排出,；
② 夾層達(dá)到預(yù)定溫度后,，打開(kāi)鍋室進(jìn)氣閥，將蒸氣引入鍋室,，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動(dòng)排出,；
③待鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力與溫度時(shí)，調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥,，使保持恒定至滅菌完成,；
④自然或人工降溫至60℃再開(kāi)門(mén)取物，不得使用快速排出蒸氣法,，以防突然降壓,，液體劇烈沸騰或容器爆破；
⑤使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸氣滅菌器,，在放好物品關(guān)緊門(mén)后,，應(yīng)根據(jù)物品類別按 動(dòng)相應(yīng)開(kāi)關(guān)，以便按要求程序自動(dòng)進(jìn)行滅菌,，滅菌時(shí)必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時(shí)間以備查,，操作要求應(yīng)嚴(yán)格按照廠家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

4,、滅菌溫度與時(shí)間
（1）干熱滅菌器滅菌溫度160℃,，1.5-2h。
（2）壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時(shí)間一般為121℃,15min,。

（二）間歇滅菌方法
1,、滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞,，可用此法滅菌,。
（1）將欲滅菌物品置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋，打開(kāi)排水口,，使器內(nèi)余水排盡,；
（2）關(guān)閉排水口，打開(kāi)進(jìn)氣門(mén),，根據(jù)需要消毒10～20min,；    
（3）滅菌完畢關(guān)閉進(jìn)氣門(mén)，取出物品待冷至室溫溫度,，放入37℃溫箱過(guò)夜,，次日仍按上述方法消毒，如此三次,，即可達(dá)到滅菌目的,。

2、血清凝固器使用方法,，培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成份時(shí),，因高熱會(huì)破壞其營(yíng) 養(yǎng)成份，故用低溫,，可使血清凝固,，又可達(dá)到滅菌目的。
（1）在使用該法滅菌的血清等分裝時(shí),，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作,，試管、平皿也經(jīng)滅菌后使用,；
（2）將培養(yǎng)基按要求使成斜面或高層,，加足水后，接上電源,，升溫75～90℃1h滅菌,，放37℃溫箱過(guò)夜，再如此滅菌三次,。

3,、煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15 min,，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5 min,，加入0.02%甲醛，80℃煮60 min均可達(dá)到滅菌目的,， 但選用 煮沸消毒的增消劑時(shí),， 應(yīng)注意對(duì)物品的腐蝕性。

4,、滅菌處理：滅菌后物品,，按正常情況已屬無(wú)菌,，從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查放置，以免再度污染,。    
（1）物品取出,，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉,，不可作為無(wú)菌物品使用,；   
（2）取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者,，不可作為無(wú)菌物品使用,；
（3）培養(yǎng)基或試劑等,，應(yīng)檢查是否符合達(dá)到滅菌后的色澤或狀態(tài),，未達(dá)到者應(yīng)廢棄；
（4）啟閉式容器,，在取出時(shí)應(yīng)將篩孔關(guān)閉,；
（5）取出的物品掉落在地或誤放不潔這處，或沾有水液,，均視為受到污染,，不可作為無(wú)菌物品使用；
（6）取出的合格滅菌物品,，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi),，嚴(yán)禁與未滅菌物品混放；
（7）凡屬合格物品,，應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限,；
（8）每批滅菌處理完成后，記錄滅菌品名,、數(shù)量,、溫度、時(shí)間,、操作者,。


四、有毒有菌污物處理要求

微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材,、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理,，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室。
1,、經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi),，并集中存放在地點(diǎn)，待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌,。

2,、經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)121℃ 30min高壓滅菌。

3,、染菌后的吸管,，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸液中，少浸泡24h（消毒液體不得低于浸泡的高度）再經(jīng)121℃ 30 min高壓滅菌,。

4,、涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道,，烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯 中,，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后,，煮沸洗滌,。做凝集試驗(yàn)用的玻片或平皿，必須高壓滅菌后洗滌,。

5,、打碎的培養(yǎng)物，立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位,，浸泡半小時(shí)后再擦拭干凈,。

污染的工作服或進(jìn)行烈性試驗(yàn)所穿的工作服、帽,、口罩等,，應(yīng)放入消毒袋內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌,。
   

五,、培養(yǎng)基制備要求

培養(yǎng)基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長(zhǎng)。因?yàn)楦鞣N微生物對(duì)其營(yíng)養(yǎng)要求不*相同,，培養(yǎng)目的的不同,，各種培養(yǎng)基制備要求如下：
1、根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱取,，然后溶于蒸餾水中,，在使用前對(duì)應(yīng)用的試劑藥 品應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。

2,、PH 測(cè)定及調(diào)節(jié)：PH測(cè)定要在培養(yǎng)基冷至室溫時(shí)進(jìn)行,，因在熱或冷的情況下，其PH有一定差異,，當(dāng)測(cè)定好時(shí),，按計(jì)算量加入堿或酸混勻后，應(yīng)再測(cè)試一次,。培養(yǎng)基 PH值一定要準(zhǔn)確,，否則會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)或影響結(jié)果的觀察,。但需注意因高壓滅菌可 影響一些培養(yǎng)基的 PH 降低或升高，故不宜滅菌壓力過(guò)高或次數(shù)太多,，以免影響培養(yǎng)基 的質(zhì)量,，指示劑、去氧膽酸鈉,、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H后再加入,。

3、培養(yǎng)基需保持澄清,，便于觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,，培養(yǎng)基加熱煮沸后，可用脫脂棉 花或絨布過(guò)濾,，以除去沉淀物,，必要時(shí)可用雞蛋白澄清處理，所用瓊脂條要預(yù)先洗凈晾干后使用,，避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度,。

4,、盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵,、銅等容器，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好,。

5,、培養(yǎng)基的滅菌既要達(dá)到*滅菌目的，又要注意不因加熱而降低其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,，一般121℃15min即可,，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類、血清,、明膠等,，則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀,、卵黃,、TTC、抗菌素等,，待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入,。

6、每批培養(yǎng)基制備好后,，應(yīng)做無(wú)菌生長(zhǎng)試驗(yàn)及所檢菌株生長(zhǎng)試驗(yàn),。如果是生化培養(yǎng)基，使用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種培養(yǎng),，觀察生化反應(yīng)結(jié)果,，應(yīng)呈正常反應(yīng),，培養(yǎng)基不應(yīng)貯存過(guò)久，必要時(shí)可置4℃冰箱存放,。

7,、目前各種干燥培養(yǎng)基較多，每批需用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行生長(zhǎng)試驗(yàn)或生化反應(yīng)觀察,，各種培養(yǎng)基用相應(yīng)菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)良好后方可應(yīng)用,，新購(gòu)進(jìn)的或存放過(guò)久的干燥培養(yǎng)基，在配制時(shí)也應(yīng)測(cè)PH,，使用時(shí)需根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)用量和方法進(jìn)行,。

8、每批制備的培養(yǎng)基所用化學(xué)試劑,、滅菌情況及菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果,、制作人員等應(yīng)做好記錄，以備查詢,。


六,、樣品采集及處理要求

1、所采集的檢驗(yàn)樣品一定要具有代表性,，采樣時(shí)應(yīng)先對(duì)該批食品原料,、加工、運(yùn)輸,、貯藏方法條件,、周圍環(huán)境衛(wèi)生狀況等進(jìn)行詳細(xì)調(diào)查，檢查是否有污染源存在,。

2,、根據(jù)食品的種類及數(shù)量，采樣數(shù)量及方法應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的要求進(jìn)行,。

3,、采樣應(yīng)注意無(wú)菌操作，容器必須滅菌,，避免環(huán)境中微生物污染,，容器不得使用煤 酚皂溶液，用新潔爾滅,、酒精等消毒滅菌,，以避免殺死樣品中的微生物，所用剪,、刀,、匙用具也需滅菌方可應(yīng)用。

4,、樣品采集后應(yīng)立即送往檢驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn),，送檢過(guò)程中一般不超過(guò)3h,，如路程較遠(yuǎn)，可保存在1～5℃環(huán)境中,，如需冷凍者,，則在凍存狀態(tài)下送檢。

5,、檢驗(yàn)室收到樣品后,，進(jìn)行登記（樣品名稱、送檢單位,、數(shù)量,、日期、編號(hào)等）,，觀察樣品的外觀,，如果發(fā)現(xiàn)有下列情況之一者，可拒絕檢驗(yàn),。
（1）樣品經(jīng)過(guò)特殊高壓,、煮沸或其他方法殺菌者，失去代表原食品檢驗(yàn)意義者,。
（2）瓶,、袋裝食品已啟開(kāi)者，熟肉及其制品,、熟禽等食品已折碎不完整者,，即失去原食品形狀者（食物中毒樣品除外）,。
（3）按規(guī)定采樣數(shù)量不足者,。
對(duì)送檢符合要求的樣品， 檢驗(yàn)室收到后,，應(yīng)立即進(jìn)行檢驗(yàn),，如果條件不具備，應(yīng)置4℃冰箱存放,，及時(shí)準(zhǔn)備創(chuàng)造條件,，然后進(jìn)行檢驗(yàn)。

6,、樣品檢驗(yàn)時(shí),，根據(jù)其不同性狀，進(jìn)行適當(dāng)處理,。
（1）液體樣品接種時(shí),，應(yīng)充分混合均勻，按量吸取進(jìn)行接種,。
（2）固體樣品,，用滅菌刀,、剪取其不同部位共25g，置于225ml 滅菌生理鹽水或其他溶液中,，用均質(zhì)器攪碎混勻后,，按量吸取接種。
（3）瓶,、袋裝食品應(yīng)用滅菌操作啟開(kāi),，根據(jù)性狀選擇上述方法處理后接種。


七,、記錄和報(bào)告的要求
1,、檢驗(yàn)室收到樣品后，行外觀檢驗(yàn),，及時(shí)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn),， 檢驗(yàn)過(guò)程中要認(rèn)真、負(fù)責(zé),、嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作,，避免環(huán)境中微生物污染。

2,、樣品檢驗(yàn)過(guò)程中所用方法,、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫(xiě)出試驗(yàn)紀(jì)錄，以作為對(duì)結(jié)果分析,、判定的依據(jù),，記錄要求詳細(xì)、清楚,、真實(shí),、客觀、不得涂改和偽造,。