的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件,。

　　ELISA檢測(cè)試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。

　　本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn),，珠式,、管式及磁性球ELSIA，國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,，嚴(yán)格遵照規(guī)定操作,，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。

　　可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,，體液（如血清 ）,、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體 或抗原成份,。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定（如血清 ,、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）,。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本,。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清,。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得,。除特殊情況外,，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用,。

　　血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。

　　血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè),。如有細(xì)菌污染,，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng),。如在冰箱中保存過(guò)久,，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA檢測(cè)試劑盒中可使本底加深,。

　　一般說(shuō)來(lái),，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存,。凍結(jié)血清

　　融解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均,，應(yīng)充分混勻宜輕緩,，避免氣泡,，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩,?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè),。反復(fù)凍融會(huì)使抗體 效價(jià)跌落,，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存,。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作,，也可加入適當(dāng)防腐劑（見(jiàn)3.2.4）,。

　　按試劑盒說(shuō)明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑,。ELISA中用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的,，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的,。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存,。

　　在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本,，加酶結(jié)合物,，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡,。

　　加標(biāo)本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,，以發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定（如間接法ELISA）需用稀的血清,，可在試管 中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和,。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過(guò)程迅速完成,。