雞 （Chicken） 干擾素-γ（IFN-γ）ELISA試劑盒說明書
本試劑僅供研究使用 標本：血清或血漿

試驗原理：
IFN-γ試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IFN-γ濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將IFN-γ和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物,，然后加入底物A、B,，和酶結合物同時作用,。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IFN-γ的濃度呈比例關系,。

試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制雞 （Chicken） 干擾素-γ（IFN-γ）ELISA試劑盒說明書
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗IFN-γ抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

自備材料
雞 （Chicken） 干擾素-γ（IFN-γ）ELISA試劑盒說明書
1． 蒸餾水,。
2． 加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul、200,、500ul,、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質,。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用,。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7． 底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9． 按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集,、處理及保存方法雞 （Chicken） 干擾素-γ（IFN-γ）ELISA試劑盒說明書
1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備,，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行：
800 pg/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
400 pg/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 pg/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pg/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

操作步驟
1． 使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產生加樣上的誤差。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
4． 甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次,。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8． 取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值,。

建議使用的實驗方案
標準品濃度（pg/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的,，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內,、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的IFN-γ標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的IFN-γ含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3,、檢測值范圍：0-800pg/ml

4,、敏感度： 1.0 pg/ml
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