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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化

時(shí)間:2011-12-27閱讀:2370

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化過(guò)程所用的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株,即不含限制性?xún)?nèi)切酶和甲基化酶的突變體(Rˉ,Mˉ),,它可以容忍外源DNA分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。受體細(xì)胞經(jīng)過(guò)一些特殊方法(如電擊法,,CaCl2,,RbCl(KCl)等化學(xué)試劑法)的處理后,細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時(shí)性的改變,,成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞 (Compenent cells),。進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子通過(guò)復(fù)制,表達(dá)實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移,,使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀,。將經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng),即可篩選出轉(zhuǎn)化子(Transformant,,即帶有異源DNA分子的受體細(xì)胞 ),。目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法有CaCl2和RbCl(KCl)法,RbCl(KCl)法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較高,,但CaCl2法簡(jiǎn)便易行,,且其轉(zhuǎn)化效率*可以滿(mǎn)足一般實(shí)驗(yàn)的要求,制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí),,可加入占總體積15%的無(wú)菌甘油于-70℃保存(半年),,因此CaCl2法為使用更廣泛。
大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
 

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