人前列腺素E2ELISA檢測試劑盒　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用      標本：細胞上清液

試驗原理：
　　　　PGE2試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知PGE2濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將PGE2和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中PGE2的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水,。
加樣器：5ul,、10ul、50ul,、100ul、200ul,、500ul,、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

人前列腺素E2ELISA檢測試劑盒　

操作注意事項
試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,，不可保存,。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水,。
底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集,、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

人前列腺素E2ELISA檢測試劑盒　

操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時,。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果,。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

人前列腺素E2ELISA檢測試劑盒　

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應(yīng)的PGE2標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的PGE2含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

3、檢測值范圍：0-800pg/ml

4,、敏感度： 1.0 pg/ml

rec Protein A/RBITC 羅丹明標記重組純化蛋白A 0.3ml
Bovine IgG/RBITC 羅丹明標記牛IgG 0.3ml
HER2 receptor（NT）（erbB-2 isoform 2 receptorN-Terminus） 抗c-erbB-2受體抗體（N端） 0.2ml
HGF（hepatocyte growth factor） 肝細胞生長因子抗體 0.1ml
HGF（hepatocyte growth factor） 肝細胞生長因子抗體 0.2ml
HGV（Hepatitis G vivus） 庚型肝炎病毒抗體 0.2ml
HHV8/ORF K2（Human herpesvirus 8） 人類皰疹病毒8抗體 0.1ml
HHV8/ORF50（Human herpesvirus 8 type P） 人類皰疹病毒8抗體 0.1ml
HHV8/ORF50（Human herpesvirus 8 type P） 人類皰疹病毒8抗體 0.2ml
Chicken IgG/RBITC 羅丹明標記雞IgG 0.3ml
Chicken IgM/RBITC 羅丹明標記雞IgM 0.3ml
HHV8/ORF K2（Human herpesvirus 8 type P） 人類皰疹病毒8抗體 0.1ml
HHV8/ORF K2（Human herpesvirus 8 type P） 人類皰疹病毒8抗體 0.2ml
HIF-1α （Hypoxia-inducible factor -1α） 人類皰疹病毒8抗體 0.1ml
HIF-1α （Hypoxia-inducible factor -1α） 缺氧誘導因子1α 抗體 0.2ml
HIF-1β/ARNT1（Hypoxia-inducible factor -1β） 缺氧誘導因子1α 抗體 0.2ml
HIF-2α （Hypoxia-inducible factor-2α） 缺氧誘導因子1β 抗體 0.2ml
Histone H2/HTB901 抗乙?；M蛋白H1b抗體 0.2ml
phospho Histone H1,4（pSer27） 組蛋白H3樣蛋白抗體（Brassica juncea N端抗體 0.2ml
dog IgM/RBITC 羅丹明標記狗IgM 0.3ml
Goat IgM/RBITC 羅丹明標記羊IgM 0.3ml
Guinea IgG/RBITC 羅丹明標記豚鼠IgG 0.3ml
Guinea IgM/RBITC 羅丹明標記豚鼠IgM 0.3ml