人髓鞘堿性蛋白ELISA檢測試劑盒　　　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用  標本：腦脊液

試驗原理：
　　　　MBP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知MBP濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將MBP和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用。產生顏色,。顏色的深淺和樣品中MBP的濃度呈比例關系,。

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200,、500ul,、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

人髓鞘堿性蛋白ELISA檢測試劑盒

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

樣品收集,、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人髓鞘堿性蛋白ELISA檢測試劑盒

操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產生加樣上的誤差,。
根據待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內,。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值,。

6號標準品以上的結果為非線性的,，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內,、板間變異系數(shù)均小于10%。

人髓鞘堿性蛋白ELISA檢測試劑盒

結 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的MBP標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的MBP含量可根據其OD值由標準曲線換算出濃度。

3,、檢測值范圍：0-80ng/ml

4,、敏感度： 0.1 ng/ml

p58ipk/DNAJC3（Protein Kinase Inhibitor P58） p58ipk抗體 0.2ml
P63 protein P63 腫瘤抑制基因抗體 0.1ml
P63 protein P63 腫瘤抑制基因抗體 0.2ml
P73 protein P73腫瘤抑制基因抗體 0.2ml
p70 S6 Kinase/P70 β1 抗核糖體S6蛋白激酶抗體 0.1ml
p70 S6 Kinase/P70 β1 抗核糖體S6蛋白激酶抗體 0.2ml
phospho-P70 S6 Kinase beta （pThr421+pSer424）抗磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 0.2ml
Rabbit anti-Goat IgM/Cy3 熒光素Cy3標記兔抗羊IgM 0.1ml
Rabbit anti-mouse IgG/Cy3 熒光素Cy3標記兔抗小鼠IgG 0.1ml
Rabbit anti-mouse IgM/Cy3 熒光素Cy3標記兔抗小鼠IgM 0.1ml
Rabbit anti-horse IgG/Cy3 熒光素Cy3標記兔抗馬IgG 0.1ml
PACAP2/VIP receptorII 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體 0.2ml
PACAP1/VIP receptor-I 腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-I/血管活性腸肽-I抗體 0.2ml
PACAP-27/38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38抗體 0.2ml
PACAP-38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體 0.2ml
PADI4/PAD4（Protein-arginine deiminase typeIV）-PADI4/PAD4（Protein-arginine deiminase type IV） 關節(jié)炎相關基因抗體 0.1ml
PADI4/PAD4（Protein-arginine deiminase typeIV）-PADI4/PAD4（Protein-arginine deiminase type IV） 關節(jié)炎相關基因抗體 0.2ml
PAF （plaet-activating factor） 血小板活化因子抗體 0.1ml
Rabbit anti-Mongolian Gerbil IgG/Cy3 熒光素Cy3標記兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml
Streptavidin/Cy3 熒光素Cy3標記鏈霉親和素 0.1ml