人胎盤生長因子ELISA 檢測試劑盒　　　　　　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用    

試驗(yàn)原理：
　　　　PLGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知PLGF濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將PLGF和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A、B,，和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PLGF的濃度呈比例關(guān)系,。

自備材料
蒸餾水,。
加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul、200ul,、500ul,、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請(qǐng)盡快用水沖洗,。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

  人胎盤生長因子ELISA 檢測試劑盒

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,，避免長時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集,、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值,。

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果,。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

  人胎盤生長因子ELISA 檢測試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的PLGF標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的PLGF含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

3、檢測值范圍：0-800pg/ml

4,、敏感度： 1.0 pg/ml

Kif14 protein 驅(qū)動(dòng)蛋白家族Member14蛋白抗體 0.2ml
Kiss-1 （Metastasis-suppressor KiSS-1 precursor） 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗體 0.2ml
Klf4（Kruppel like factor 4） 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白4抗體 0.2ml
phospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5 （pSer272） 磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體 0.2ml
KLF6（Kruppel-like factor 6） 轉(zhuǎn)染抑癌基因KLF6抗體 0.2ml
KLF13/RFLAT-1 （Kruppel like factor 13） 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子13 0.2ml
KLK1（Kallikrein 1） 激肽釋放酶1抗體 0.2ml
κOR （kappa Opioid receptor） kappa型阿片受體抗體 0.2ml
KLK3（Kallikrein 3） 激肽釋放酶3/舒血管素3抗體 0.2ml
Rabbit IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記兔IgG（細(xì)胞流式同型對(duì)照） 0.1ml
Mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記小鼠IgG（細(xì)胞流式同型對(duì)照） 0.1ml
Goat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記羊IgG（細(xì)胞流式同型對(duì)照） 0.1ml
KLK4（Kallikrein 4） 激肽釋放酶4抗體 0.2ml
KLK7（Kallikrein 7） 激肽釋放酶7抗體 0.2ml
KLK9（Kallikrein 9） 激肽釋放酶9抗體 0.2ml
KLK10（Kallikrein 10） 激肽釋放酶10抗體 0.2ml
KLK14（Kallikrein 14） 激肽釋放酶14抗體 0.2ml
K-ras 原癌基因K-ras抗體 0.1ml
K-ras 原癌基因K-ras抗體 0.2ml
Ku70（ATP dependent DNA helicase 2 subunit 1） DNA修復(fù)酶Ku70抗體 0.1ml