大鼠 （Rat） 神經(jīng)生長因子 （NGF） ELISA試劑盒云南,，昆明

本試劑僅供研究使用      標本：血清或血漿

 大鼠 （Rat） 神經(jīng)生長因子 （NGF） ELISA試劑盒云南,，昆明

試驗原理：

NGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知NGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將NGF和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中NGF的濃度呈比例關系,。

 大鼠 （Rat） 神經(jīng)生長因子 （NGF） ELISA試劑盒云南，昆明

試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型

塑料膜板蓋1塊半塊即用型

標準品：80ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀

空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型

標準品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型

生物素標記的抗NGF抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型

親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型

洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋

底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

標本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型

自備材料

1．蒸餾水,。

2．加樣器：5ul,、10ul、50ul,、100ul,、200ul、500ul,、1000ul,。

3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。

2．實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

操作注意事項

1．試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。

2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。

3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。

4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6．洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7．底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值,。

8．加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9．按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。

樣品收集、處理及保存方法

1,、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2、血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3,、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4,、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液

5,、保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1．標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備,，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行：

80 ng/ml（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

40 ng/ml（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液

20 ng/ml（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液

10 ng/ml（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液

5.0 ng/ml（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液

2.5 ng/ml（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液

0 ng/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

操作步驟

1．使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。

2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi),。

3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。

4．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。

5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。

6．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

7．每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。

8．取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果。

9．在450nm波長處測定各孔的OD值,。

建議使用的實驗方案

標準品濃度（ng/ml）

A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

局限

6號標準品以上的結果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。

3. 重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析

1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的NGF標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的NGF含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3,、檢測值范圍：0-80ng/ml

4,、敏感度： 0.1 ng/ml

A6817-25gAcridine hydrochloride 吖啶鹽酸鹽水合物[17784-47-3]25g

AD0144-25gAlizarin red 茜素紅[130-22-3]25g

AE566-250mlAlkaline transfer solution, 10x solution 溶液/250ml

AB0094-5gArsenazo III 偶氮砷III[1668-00-4]5g

A742007-10gAcridine orange, hemi salt 吖啶橙[10127-02-3]10g

A6298-25gAcridine orange hydrochloride , hydrate 吖啶鹽酸鹽[65-61-2]25g

AD0009-25gAcriflavine,neutral 吖啶黃素[8048-52-0]25g

AB4433-25gAcriflavine hydrochloride 鹽酸吖啶黃[8063-24-9]25g

AB4433-100gAcriflavine hydrochloride 鹽酸吖啶黃[8063-24-9]100g

A0341-500gAcrylamide 丙烯酰胺[79-06-1]500g

A0729-40gAcryl/Bis 19:1, premixed powder 丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺（19:1），干粉/40g