雞C-反應蛋白(CRP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：96T

30µg/L -800µg/L

使用目的：

本試劑盒用于測定雞血清,、血漿及相關液體樣本中 C-反應蛋白(CRP)含量,。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞 C-反應蛋白(CRP)水平。用純化的雞 C-反應蛋白(CRP)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入C-反應蛋白(CRP),，再與 HRP標記的  C-反應蛋白(CRP)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的,。顏色的深淺和樣品中的  C-反應蛋白(CRP)呈正相關,。用酶標儀在   450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞  C-反應蛋白(CRP)濃度,。

試劑盒組成：

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能

馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟：

1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋,。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、

待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，

然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去,，如此

重復 5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

15分鐘.

10.終止：每孔加終止液    50µl,，終止反應（此時藍色立轉）。

11.測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應在加終止

液后 15分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,， OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與  OD值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間好

控制在 5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本  OD值

大于標準品孔孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計

算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月