大鼠5羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：96T

15 ng/L -400 ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關液體樣本中 5羥色胺(5-HT)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 5羥色胺(5-HT)水平,。用純化的大鼠  5羥色胺(5-HT)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 5羥色胺(5-HT),，再與 HRP標記的  5羥色胺(5-HT)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的,。顏色的深淺和樣品中的 5 羥色胺(5-HT)呈正相關。用酶標儀在 450nm  波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠  5羥色胺(5-HT)濃度,。

試劑盒組成

大鼠5羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置     37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水    30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去,，如此重復 5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液    50µl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)）,。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行,。

操作程序總結(jié)：

計算

以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

大鼠5羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在 5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，好做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值大于標準品孔孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月