牛玻連(VN)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：96T
15pg/ml-400pg/ml

使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中玻連(VN)含量,。

牛玻連(VN)酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛玻連(VN)用純化的牛玻連(VN)
抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入玻連(VN),，再與  HRP，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在 HRP  酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的玻連(VN)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在  450nm 波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛玻連(VN)濃度。

試劑盒組成

標(biāo)本要
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過（HRP）活性,。

牛玻連(VN)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后  37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將 30倍濃  30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體 ,。甩干,，每孔加滿洗滌液，靜30秒后棄去,，如此重復(fù) 5次,，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外,。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50µl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）,。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總：

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。

牛玻連(VN)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有
析出,，稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間好
控制在 5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計(jì)
算時(shí)請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉
6．底物請避光保存,。。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月