雞C-反應(yīng)蛋白(CRP)酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：

96T

30µg/L -800µg/L

使用目的：

本試劑盒用于測定雞血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中 C-反應(yīng)蛋白(CRP)含量,。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞  C-反應(yīng)蛋白(CRP)水平。用純化的雞  C-反應(yīng)

蛋白(CRP)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入       C-反應(yīng)蛋白

(CRP)，再與 HRP標(biāo)記的  C-反應(yīng)蛋白(CRP)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)

過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)

化成終的,。顏色的深淺和樣品中的  C-反應(yīng)蛋白(CRP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在   450nm

波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞  C-反應(yīng)蛋白(CRP)濃度,。

試劑盒組成

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋,。

 2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，

然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡

量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去,，如此

重復(fù) 5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液    50µl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止

液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的

OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，

即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間

控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔

算時(shí)請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月