牛α干擾素(IFN-α)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍：96T
1ng/L -35ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清,、血漿及相關液體樣本中 α干擾素(IFN-α)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛 α干擾素(IFN-α)水平,。用純化的牛   α干擾素
(IFN-α)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入 α干擾素(IFN-α),，
再與 HRP標記的  α干擾素(IFN-α)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗
滌后加底物 TMB顯色,。TMB在   HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終
的,。顏色的深淺和樣品中的 α干擾素(IFN-α)呈正相關,。用酶標儀在  450nm波長下測定
吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛  α干擾素(IFN-α)濃度,。
牛α干擾素(IFN-α)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒組成

標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、
待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，
96T然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去,，如此
重復 5次,，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl,，空白孔除外,。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μl,，終止反應（此時藍色立轉）。
11.測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
牛α干擾素(IFN-α)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒操作程序總結：

計算
以標準物的濃度為橫坐標,， OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與  OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間*
控制在 5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線,，*做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本  OD值
大于標準品孔di一孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10.如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。
牛α干擾素(IFN-α)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月