雞卵黃免疫球蛋白（IgY）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：96T
30 ng/L - 900ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中卵黃免疫球蛋白（IgY）含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞卵黃免疫球蛋白（IgY）水平。用純化的雞卵
黃免疫球蛋白（IgY）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入卵黃
免疫球蛋白（IgY），再與  HRP標(biāo)記的卵黃免疫球蛋白（IgY）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-
酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的,。顏色的深淺和樣品中的卵黃免疫球蛋白（IgY）呈正相
關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中雞卵黃免疫
球蛋白（IgY）濃度,。
雞卵黃免疫球蛋白（IgY）酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能
馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋,。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、
待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去，如此
重復(fù) 5次,，拍干,。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。
溫育：操作同 3,。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)）,。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
雞卵黃免疫球蛋白（IgY）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié)：

計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。
雞卵黃免疫球蛋白（IgY）酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月