本研究以我實驗室分離、篩選的彈性蛋白酶產生菌—Pseudomonas sp作為出發(fā)菌株,，利用誘變因子的協同作用，對其進行了誘變育種,，得到酶活力較高的菌株Pseudomonassp SWU-B,；研究了該菌株產彈性蛋白酶的動態(tài)變化過程；比較了不同的營養(yǎng)源與生長條件對菌株產彈性蛋白酶的影響,，優(yōu)化,、確定了菌株產彈性蛋白酶的發(fā)酵培養(yǎng)基；探討了菌株發(fā)酵產彈性蛋白酶的影響因素；初步確定了菌株發(fā)酵產彈性蛋白酶的工藝參數,，結果如下： 1．三種不同的誘變因子對Pseudomonas sp菌體細胞的致死作用表現出相似的趨勢,，在一定范圍內都與誘變劑量呈線性正相關，存活曲線呈指數型的“肩型”,。利用紫外線（UV）,、氯化鋰（LiCl）和甲基磺酸乙酯（EMS）復合誘變的協同效應，在UV（2537~*10~（-10）m,，30cm處,，輻照60s）、EMS浸泡45min后,，涂布于含有0.3％LiCl的脫脂奶營養(yǎng)瓊脂平板（NSM）上,。在協同誘變條件下，多輪反復誘變Pseudomonas sp后,，菌株的酶活力有所提高,，篩選到了彈性蛋白酶活力單位提高了35.49％的菌株—Pseudomonas sp SWU-B。誘變因子的復合,、協同誘變,，可以減弱單一誘變劑反復誘變產生的誘變抗性和飽和性，是一種有效的選育優(yōu)良菌株的方法,。 2．復合碳源有利于假單胞菌SWU-B （Pseudomonas sp SWU-B）產彈性蛋白酶；碳氮比（C／N）低的營養(yǎng)源,，發(fā)酵液的zui終pH=8.2±0.4,，利于彈性蛋白酶的產生和活性的穩(wěn)定。葡萄糖,、蔗糖混合碳素為營養(yǎng)源時,，菌株產彈性蛋白酶的能力優(yōu)于單一的碳源，能夠促進菌株產生彈性蛋白酶,；干酪素是產彈性蛋白酶的*氮源,。試驗結果表明：菌株SWU-B在營養(yǎng)組分為（g／L）：葡萄糖，1％,；蔗糖,，3％；干酪素,，3％,；Na_2HPO_4，0.3％,；MgSO_4.7H_2O,，0.01％；pH=7.2的液體培養(yǎng)基中能夠較大限度地產生彈性蛋白酶。 3．Pseudomonas sp SWU-Bzui適生長溫度為37℃,，16h進入生長穩(wěn)定期,，在此時菌株開始大量的產生、分泌彈性蛋白酶,；在28℃,、150rpm振蕩、12h種子液,、4％接種量時,，利于菌體產彈性蛋白酶，24h時達到產酶高峰,。 4．菌體細胞壁膜的滲透性對彈性蛋白酶的分泌有較大的影響,，發(fā)酵液中Tween80為0.2％（v／w）時能有效地促進酶的產生分泌；青霉素通過破壞細胞壁中的肽聚糖,，改變細胞膜,、壁的結構，能增加菌體的通透性,，促進彈性蛋白酶 中文摘要 的分泌,，其具體機制需要進一步研究。 5．彈性蛋白酶的親和底物能激活 Pseudomonas Sp SWU－B菌體產彈性蛋白酶 的機制,，促進彈性蛋白酶的產生,。彈性蛋白、大豆分離蛋白均能誘導酶的產 生,。發(fā)酵培養(yǎng)基中添加 0．40％（w／w）的大豆分離蛋白,，能較好的誘導菌體產彈 性蛋白酶。酪氨酸,、精氨酸能促進酶的產生,，0刀1％的酪氨酸效果較好。 6．補加碳源,、氮源和分段變溫培養(yǎng)利于菌體產生彈性蛋白酶,，在 12h時補 加一倍的營養(yǎng)源、改變培養(yǎng)溫度能有效的促進酶的產生,。添加消泡劑,，改善了 菌體的生長環(huán)境，有利于彈性蛋白酶的產生,。以花生油為消泡劑時,，0．3％的添 加量效果較佳。 7．在優(yōu)化的發(fā)酵條件下,，Pseudomonas Sp SWU習經 24h五批次發(fā)酵后,，原 發(fā)酵液平均酶活力達到 28UhaL，zui高達到 32U／inL，發(fā)酵液經鹽析《NH4） 劣O＊和透析,，酶的比活力達到 100U／mg．蛋白質,，其潛在的開發(fā)價值較大。