本產(chǎn)品僅供研究使用                                                     
【試劑盒名稱】
雞白細胞介素2（IL-2）定量檢測試劑盒（ELISA）
【試劑盒用途】
定量檢測雞血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素2（IL-2）的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品,、待測樣本加入到預(yù)先包被雞白細胞介素2（IL-2）單克隆抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成，顏色的深淺與樣品中雞白細胞介素2（IL-2）濃度呈正相關(guān),，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中雞白細胞介素2（IL-2）含量,。
【試劑盒組成】

1
 酶標包被板
 12孔×8條
 7
 顯色劑A液
 6mL
 
2
 標準品
 0.3mL×6管
 8
 顯色劑B液
 6mL
 
3
 20倍濃縮洗滌液
 25mL
 9
 終止液
 6mL
 
4
 樣本稀釋液
 6mL
 10
 說明書
 1份
 
5
 特殊稀釋液
 6mL
 11
 封板膜
 2張
 
6
 酶標試劑
 6mL
 12
 密封袋
 1個
 

備注：標準品（1號→6號）濃度依次為：320,、160、80,、40,、20、10 ng/L.
 
【需要而未提供的試劑和器材】
1,、37℃恒溫箱
2,、標準規(guī)格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4,、蒸餾水
5,、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1,、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加。
7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min。
10,、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)）,。
11,、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2,、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3,、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒,。
【注意事項】
1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
2,、酶標包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3,、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實驗誤差,。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
5、本試劑盒定量范圍為10-320ng/L,，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結(jié)果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（10-320ng/L范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6,、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間。
7,、為避免交叉污染,，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜。
8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用。
9,、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。
 
 
【操作程序總結(jié)】
 
準備試劑,，樣品和標準品
 

加入準備好的樣品和標準品,，37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板4次，加入酶標試劑,，37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板4次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計算
 
【檢測范圍】
10ng/L - 320ng/L
【規(guī)格】
96人份/盒
【貯藏】
2-8℃,，避光防潮保存。
【有效期】
6個月