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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>如何讓干細(xì)胞不分化 新型培養(yǎng)基來幫忙
為了保持hESC存活且具有多能性,,研究人員通常在滋養(yǎng)層細(xì)胞(也就是一層小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)上培養(yǎng),或者在微載體上成簇培養(yǎng),。但是在這些基質(zhì)上培養(yǎng)干細(xì)胞是相當(dāng)昂貴的,,而且培養(yǎng)物不能在很長時間內(nèi)保持未分化狀態(tài),盡管所有必需的生長因子都存在,。
Reubinoff的研究團隊正在研究hESC簇分化成神經(jīng)細(xì)胞,,他們一直在使用Invitrogen的Neurobasal培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基能夠在無滋養(yǎng)層的條件下長時間維持神經(jīng)細(xì)胞的生長和正常表型,。在研究過程中,,研究人員注意到并非所有細(xì)胞都分化了。他們懷疑是培養(yǎng)基的選擇導(dǎo)致了這種現(xiàn)象,,于是他們開始集中精力研究培養(yǎng)基如何促進(jìn)干細(xì)胞生長并抑制分化,。
使用這種新的培養(yǎng)基,研究小組檢驗了三種不同的hESC系。他們利用熒光激活細(xì)胞分選(FACS)在7周和20周后分析了培養(yǎng)物,,發(fā)現(xiàn)90%的細(xì)胞仍維持多能性,。這項突破為在計算機化的自動系統(tǒng)中大規(guī)模擴增胚胎干細(xì)胞創(chuàng)造了可能性。此外,,通過改變培養(yǎng)條件,,還可能進(jìn)一步指導(dǎo)干細(xì)胞長成特定的細(xì)胞類型,用于研究或病人的移植,。
為了驗證他們的理論,,研究小組定制了培養(yǎng)基。他們在Neurobasal培養(yǎng)基中加入了血清替代物,,還加入了干細(xì)胞生長所需的蛋白,,包括細(xì)胞外基質(zhì)組分、神經(jīng)營養(yǎng)因子,、成纖維細(xì)胞生長因子2和活化素A,。研究人員在常規(guī)的無血清培養(yǎng)基和定制培養(yǎng)基中培養(yǎng)了hESC。三個星期之后,,定制培養(yǎng)基中存在更多的未分化hESC細(xì)胞,。
然而,研究小組也承認(rèn),,他們的方法并不,。在細(xì)胞傳代過程中,他們丟失的細(xì)胞數(shù)是滋養(yǎng)層培養(yǎng)方法的近3倍,。他們還將繼續(xù)完善這種技術(shù),,以確保培養(yǎng)產(chǎn)量盡可能地高。
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