1．細胞：選對數(shù)生長期細胞,，收集細胞24小時前換液一次。

2．計數(shù)：按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液,，計數(shù)，令細胞密度達5×10⁶/ml,，離心去上清，吸入離心管中,。

3．凍存液：先用培養(yǎng)液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液,，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸,。

4．分裝：分裝入無菌安剖中,，每安剖加1.5毫升細胞懸液。

5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可,；如用火焰封閉安剖口后,，仔細檢查，定要封嚴,，必要時可浸入藍色液中觀察,，為安全起見，把安剖縫入紗布小袋中,，以防液氮浸入后,，融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人；紗袋一端系以線繩,，末端扎有小牌,，注明：細胞名稱，凍存日期,，以便日后查找,。

復(fù)蘇方法

1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴,，浸入了液氮,，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套,。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中,，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍,。

3．剪開紗布口袋,，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后,，凈化臺上打開蓋,，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中,，再補加10ml培養(yǎng)液,，吹打使細胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘,，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗,、離心,。

5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中,，置溫箱培養(yǎng),，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。