污染是細胞培養(yǎng)的大敵,。預防和避免污染是細胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一,。一開始就要十分重視，應積極采取措施，防止污染,，否則會前功盡棄，不僅浪費時間,，而且浪費人力,、物力，甚至造成無法彌補的損失,。

　　*節(jié)污染的類型

　　細胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物,，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質(zhì),，包括生物和化學物質(zhì),。

　　一、細菌污染

　　細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染,，即使在細胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素（一般為預防劑量）,，也可能因為操作不慎而引起污染。zui常見的有革蘭氏陽性菌,，如枯草桿菌以及大腸桿菌,、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見,。

　　培養(yǎng)細胞受細菌污染后,，會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變,。也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變，只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染,。所以,，每天應仔細觀察。污染后細胞發(fā)生病理改變,，胞內(nèi)顆粒增多,、增粗，zui后變圓脫落死亡,，造成試驗失敗和細胞株（系）丟失,。

　　二、真菌污染

　　真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種,，尤其在霉雨季節(jié)進行細胞培養(yǎng)更易污染,。zui常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌,、孔子霉,、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌,。

　　培養(yǎng)細胞受真菌污染后,，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺的小點,，有的散在生長，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁,；倒置顯微鏡下可見絲狀,、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列,。念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細胞周邊和細胞之間,。個體細小，有增多趨勢,。鏡下看時,，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆,。真菌污染后,，細胞生長變慢，但zui后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡,。

　　三,、支原體污染

　　支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的zui小微生物，zui小直徑0.2μm,，一般過濾除菌無法去除它,，光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn),，能在偏堿條件（pH7.6～8.0）下生存,，對青霉素有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間,。電鏡下可見其有三層結(jié)構(gòu),，無細胞壁，中央有電子密度大的密集顆?；蚪z狀的中心囊,。

　　培養(yǎng)細胞受支原體污染后，部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢,，部分細胞變圓,，從瓶壁脫落。但多數(shù)細胞污染后無明顯變化,，或略有變化,，若不及時處理，還會產(chǎn)生交叉污染,。

　　四,、病毒污染

　　采用組織細胞培養(yǎng)法生產(chǎn)疫苗，如果沒有除去潛在病毒的組織培養(yǎng)物,，會產(chǎn)生病毒污染,。目前,，從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),，但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。若二倍體細胞系有SV40或多發(fā)瘤病毒，B淋巴細胞含EB病毒,，細胞和會發(fā)生變異,、轉(zhuǎn)化，形成異倍體的細胞系,。因此,，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題,。

　　五,、非同種細胞污染

　　由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開，操作不當,，往往會使一種細胞被另一種細胞污染,。如“靈長類”細胞系發(fā)現(xiàn)猴和鼠類細胞的混合物，ERK/KD細胞是從兔腎中分離出來的,，而現(xiàn)在句卻認為是HeLa細胞,。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,，致使許多實驗宣告無效,。

　　非細胞培養(yǎng)物所造成的化學成分的污染也偶有發(fā)生，大多是由于細胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學物質(zhì)所致,。