污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵,。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一,。一開(kāi)始就要十分重視,，應(yīng)積極采取措施，防止污染,，否則會(huì)前功盡棄,，不僅浪費(fèi)時(shí)間，而且浪費(fèi)人力,、物力,，甚至造成無(wú)法彌補(bǔ)的損失。

　　*節(jié)污染的類型

　　細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染不僅僅指微生物,，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的,、對(duì)細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì),。

　　一,、細(xì)菌污染

　　細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染，即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素（一般為預(yù)防劑量）,，也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴?。zui常見(jiàn)的有革蘭氏陽(yáng)性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌,、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,，其中又以白色葡萄球菌較常見(jiàn)。

　　培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后,，會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,，pH改變。也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無(wú)多少改變,，只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染,。所以，每天應(yīng)仔細(xì)觀察,。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,，胞內(nèi)顆粒增多、增粗,，zui后變圓脫落死亡,，造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株（系）丟失。

　　二,、真菌污染

　　真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中zui常見(jiàn)的一種,，尤其在霉雨季節(jié)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。zui常見(jiàn)的真菌有煙曲霉,、黑曲菌,、孔子霉、毛霉菌,、白色念珠菌和酵母菌,。

　　培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后,，可見(jiàn)培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺的小點(diǎn)，有的散在生長(zhǎng),，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁,；倒置顯微鏡下可見(jiàn)絲狀、管狀或樹(shù)枝狀的菌絲縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中,，有的呈鏈狀排列,。念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間。個(gè)體細(xì)小,，有增多趨勢(shì),。鏡下看時(shí)，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈,，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長(zhǎng)的菌絲相混淆,。真菌污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢,，但zui后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡,。

　　三、支原體污染

　　支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的zui小微生物,，zui小直徑0.2μm,，一般過(guò)濾除菌無(wú)法去除它，光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu),。開(kāi)始不易發(fā)現(xiàn),，能在偏堿條件（pH7.6～8.0）下生存，對(duì)青霉素有抗藥性,。多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間。電鏡下可見(jiàn)其有三層結(jié)構(gòu),，無(wú)細(xì)胞壁,，中央有電子密度大的密集顆粒或絲狀的中心囊,。

　　培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后,，部分敏感細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變慢，部分細(xì)胞變圓,，從瓶壁脫落,。但多數(shù)細(xì)胞污染后無(wú)明顯變化，或略有變化,，若不及時(shí)處理,，還會(huì)產(chǎn)生交叉污染。

　　四,、病毒污染

　　采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法生產(chǎn)疫苗,，如果沒(méi)有除去潛在病毒的組織培養(yǎng)物,，會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前,，從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒,。盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。若二倍體細(xì)胞系有SV40或多發(fā)瘤病毒,，B淋巴細(xì)胞含EB病毒，細(xì)胞和會(huì)發(fā)生變異,、轉(zhuǎn)化,，形成異倍體的細(xì)胞系。因此,，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗,、干擾素等生物制品制作中的難題。

　　五,、非同種細(xì)胞污染

　　由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴(yán)格分開(kāi),，操作不當(dāng)，往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染,。如“靈長(zhǎng)類”細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)猴和鼠類細(xì)胞的混合物,，ERK/KD細(xì)胞是從兔腎中分離出來(lái)的，而現(xiàn)在句卻認(rèn)為是HeLa細(xì)胞,。目前,，世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效,。

　　非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生,，大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。